反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
流式细胞术(固定/通透) | 1:50 |
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
人
使用与人 Btk 蛋白中 Tyr551 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Bruton 酪氨酸激酶 (Btk) 是细胞质酪氨酸激酶 Btk/Tec 家族的成员。与其他 Btk 家族成员一样,它含有一个 pleckstrin 同源性 (PH) 结构域以及 Src 同源性 SH3和 SH2 结构域。Btk 在 B 细胞发育中发挥重要作用 (1,2)。各种配体激活 B 细胞的同时,Btk 膜转位受到其 PH 结构域与磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸结合的介导 (3-5)。Btk 定位于细胞膜后具有活性并瞬间磷酸化两个酪氨酸残基 Tyr551 和 Tyr223激活环中的 Tyr551 位点被 Src 家族酪氨酸激酶转磷酸化导致在 SH3 结构域内的 Tyr223 位点的自磷酸化,这对 B 细胞的完全激活非常重要 (6,7)。PKCβ 通过磷酸化 Btk 的 Ser180 位点而负向调控 Btk 的激活,并导致了细胞膜招募能力降低、磷酸根转移和后续的激活8。PKC 抑制信号可能是 B 细胞受体信号转导阈值维持最佳 Btk 活性的重要决定因素 (8)。
探索与本品相关的通路。
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