反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:200 - 1:800 |
流式细胞术(固定/通透) | 1:50 |
流式细胞术(活性) | 1:50 |
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2010 年 12 月
实验步骤编号:220
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
注:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。
注:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
发布时间 2017 年 6 月
修订时间 2022 年 1 月
实验步骤编号:1504
人
使用表达全长 PD-L1 蛋白的哺乳动物细胞对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
程序性细胞死亡蛋白 1 配体 1 (PD-L1, B7-H1, CD274) 是细胞表面配体 B7 家族的一员,该家族可调控 T 细胞激活和免疫应答。PD-L1 配体结合 PD-1 跨膜受体并抑制 T 细胞激活。在找到许多 B7 蛋白同源物后,PD-L1 被发现,后来表明它在抗原呈递细胞、激活的 T 细胞以及胎盘、心脏和肺等组织中表达 (1-3)。PD-L1 在结构上与 B7 家族成员相似,它包含胞外 IgV 和 IgC 结构域和一个短细胞浆区域。研究表明,PD-L1 在黑色素瘤、卵巢癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌和肾细胞癌等许多肿瘤类型的细胞中表达 (4-6)。PD-L1 在癌细胞中的表达与肿瘤浸润性淋巴细胞有关,可通过释放干扰素 γ 介导 PD-L1 表达 (7)。其他研究表明 PD-L1 表达与病毒感染相关癌症有关 (8,9)。
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