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25048
PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #25048

引用 (5)
筛选器:
  1. IF
  2. F
Immunofluorescence Image 1: PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
使用 PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) (Alexa Fluor® 488 Conjugate) Rabbit mAb(绿色)对 HCC1954(左图)、MDA-MB-231(中图)和 A549(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Flow Cytometry Image 1: PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
使用 PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #2975(虚线)对 Ramos 细胞(蓝色)和 SUP-M2 细胞(绿色)进行流式细胞分析。
To Purchase # 25048S
目录# 规格 价格 库存
25048S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

这种 Cell Signaling Technology 抗体偶联于 Alexa Fluor® 488 荧光染料,并针对人细胞中直接流式细胞分析接受内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联 PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb #86744 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:200 - 1:800
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液与试剂

注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 甲醇,100%
  4. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  5. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (9998),并混合。
  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用
  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸去固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 甲醇通透步骤:在细胞上覆盖冰冷的 100% 甲醇(使用足够的甲醇完全覆盖至 3–5 mm,不要让其干燥),并在 –20°C 下用甲醇孵育 10 分钟,同时用 1X PBS 漂洗 5 分钟。
  2. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  3. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  4. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  5. 4°C 温度下孵育过夜
  6. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  7. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 以及带 DAPI (#8961) 的 Prolong® Gold AntiFade Reagent 盖住切片。
  8. 为达到最佳效果,立即以适当的激发波长检测标本。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2010 年 12 月

实验步骤编号:220

流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

特异性/灵敏度

PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可识别内源水平的 PD-L1 总蛋白。

物种反应性:

来源/纯化

使用表达全长 PD-L1 蛋白的哺乳动物细胞对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

程序性细胞死亡蛋白 1 配体 1 (PD-L1, B7-H1, CD274) 是细胞表面配体 B7 家族的一员,该家族可调控 T 细胞激活和免疫应答。PD-L1 配体结合 PD-1 跨膜受体并抑制 T 细胞激活。在找到许多 B7 蛋白同源物后,PD-L1 被发现,后来表明它在抗原呈递细胞、激活的 T 细胞以及胎盘、心脏和肺等组织中表达 (1-3)。PD-L1 在结构上与 B7 家族成员相似,它包含胞外 IgV 和 IgC 结构域和一个短细胞浆区域。研究表明,PD-L1 在黑色素瘤、卵巢癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌和肾细胞癌等许多肿瘤类型的细胞中表达 (4-6)。PD-L1 在癌细胞中的表达与肿瘤浸润性淋巴细胞有关,可通过释放干扰素 γ 介导 PD-L1 表达 (7)。其他研究表明 PD-L1 表达与病毒感染相关癌症有关 (8,9)。
  1. Dong, H. et al. (1999) Nat Med 5, 1365-9.
  2. Freeman, G.J. et al. (2000) J Exp Med 192, 1027-34.
  3. Liang, S.C. et al. (2003) Eur J Immunol 33, 2706-16.
  4. Dong, H. et al. (2002) Nat Med 8, 793-800.
  5. Thompson, R.H. et al. (2006) Cancer Res 66, 3381-5.
  6. Pardoll, D.M. (2012) Nat Rev Cancer 12, 252-64.
  7. Taube, J.M. et al. (2012) Sci Transl Med 4, 127ra37.
  8. Lyford-Pike, S. et al. (2013) Cancer Res 73, 1733-41.
  9. Chen, B.J. et al. (2013) Clin Cancer Res 19, 3462-73.

通路与蛋白质

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
CellSimple 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料接合物已获得 Life Technologies Corporation 的许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列和高内涵筛选 (HCS) 合并使用。
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