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PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) #14123

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Flow Cytometry Image 1: PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)

使用 PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) 对固定和通透的 Ramos 细胞(蓝色,阴性)和 SUP-M2 细胞(绿色,阴性)进行流式细胞分析。

Flow Cytometry Image 2: PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)

以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE Conjugate) #5742(红色)作为对照,使用 PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)(绿色)对固定和通透的 SUP-M2 细胞进行流式细胞分析。

购买 # 14123S
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14123S
100 µl (50 次测试)

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感谢您的耐心等待。

支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人体细胞进行了直接的流式细胞术分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联 PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb #13684 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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针对直接偶联抗体的甲醇透化实验步骤(流式细胞术)

A. 溶液和试剂

本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS):要制备 1 L 1X PBS:添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 4% 甲醛,不含甲醇 (#47746)
  3. 100% 甲醇 (#13604):用前冷却
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表

B. 固定

:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。

注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。

注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 进行离心使细胞沉淀,并去除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛的密度重悬细胞。混匀以解离沉淀物,并阻止个别细胞出现交联。
  3. 在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 0.5-1 ml 1 X PBS 中重悬细胞。继续进行通透步骤。
    1. 或者,细胞可放在 1X PBS 中保存在 4°C 下过夜。

C. 通透

  1. 通过温和涡旋混合情况下向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇的终浓度,以通透细胞。
  2. 在冰上通透至少 10 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞储存于 -20°C 的 90% 甲醇中。

D. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。(通常,每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心分离,用足够的 1X PBS 洗涤以清除甲醇。将上清液丢弃在合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 室温孵育 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液或 1X PBS 进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上进行分析。

发布​于 2009 年 7 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号:407

特异性/敏感性

PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) 可识别内源水平的 PD-L1 总蛋白。

物种反应性:

来源/纯化

使用与人 PD-L1 蛋白中羧基末端周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

程序性细胞死亡蛋白 1 配体 1 (PD-L1, B7-H1, CD274) 是细胞表面配体 B7 家族的一员,该家族可调控 T 细胞激活和免疫应答。PD-L1 配体结合 PD-1 跨膜受体并抑制 T 细胞激活。在找到许多 B7 蛋白同源物后,PD-L1 被发现,后来表明它在抗原呈递细胞、激活的 T 细胞以及胎盘、心脏和肺等组织中表达 (1-3)。PD-L1 在结构上与 B7 家族成员相似,它包含胞外 IgV 和 IgC 结构域和一个短细胞浆区域。研究表明,PD-L1 在黑色素瘤、卵巢癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌和肾细胞癌等许多肿瘤类型的细胞中表达 (4-6)。PD-L1 在癌细胞中的表达与肿瘤浸润性淋巴细胞有关,可通过释放干扰素 γ 介导 PD-L1 表达 (7)。其他研究表明 PD-L1 表达与病毒感染相关癌症有关 (8,9)。

  1. Dong, H. et al. (1999) Nat Med 5, 1365-9.
  2. Freeman, G.J. et al. (2000) J Exp Med 192, 1027-34.
  3. Liang, S.C. et al. (2003) Eur J Immunol 33, 2706-16.
  4. Dong, H. et al. (2002) Nat Med 8, 793-800.
  5. Thompson, R.H. et al. (2006) Cancer Res 66, 3381-5.
  6. Pardoll, D.M. (2012) Nat Rev Cancer 12, 252-64.
  7. Taube, J.M. et al. (2012) Sci Transl Med 4, 127ra37.
  8. Lyford-Pike, S. et al. (2013) Cancer Res 73, 1733-41.
  9. Chen, B.J. et al. (2013) Clin Cancer Res 19, 3462-73.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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