Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
26969S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | M |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
小鼠
使用与小鼠 FcγRIIB 蛋白 Pro284 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
FcγRIIB (CD32B) 是一种低亲和力的、结合 IgG Fc 的受体,它在 B 细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞 (DC) 中表达 (1-3)。它是抑制性 Fc 受体,并通过其羧基末端细胞浆尾区内的免疫受体酪氨酸抑制基序 (ITIM) 传递信号 (2)。免疫复合体结合 FcγRIIB 会导致 ITIM 基序在 Tyr292 位点出现酪氨酸磷酸化以及磷酸酶 SHIP 募集,从而介导对免疫细胞激活的抑制作用 (2,4)。这样,FcγRIIB 抑制激活 Fc 结合受体的作用 (3)。例如,在注射免疫复合体之后,FcγRIIB 缺失的小鼠出现 T 细胞和 DC 反应增强 (5,6)。此外,FcγRIIB 还在 B 细胞亲和力成熟中发挥作用 (7)。在无信号转导通过 B 细胞受体 (BCR) 的情况下,通过 FcγRIIB 进行的信号转导具有促凋亡作用,而同时通过 FcγRIIB 和 BCR 进行的信号转导则会减弱凋亡信号,并导致选择抗原亲和力较高的 B 细胞 (7)。
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