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7687
E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #7687

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筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)

使用 E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)(红色)对 MCF7(左图)和 HeLa(右图)细胞进行免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。

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7687S
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支持数据

反应性 H M
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 594荧光染料,并可对人体细胞进行免疫荧光分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb #3195 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 通透缓冲液 (1X PBS/0.2% Triton X-100):
    要配制 25 ml,添加 2.5 ml 10X PBS 到 22.5 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 50 µl Triton X-100。
  4. Image-iT™ FX Signal Enhancer (#11932)
  5. 封闭缓冲液(1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清(例如 Normal Goat Serum (#5425))和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O 中并充分混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  6. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (9998),并混合。
  7. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注: 细胞应在多孔板、室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用
  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸去固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在通透缓冲液中室温通透处理细胞 5 分钟。
  2. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  3. 滴 3-4 滴 Image-iT™ FX Signal Enhancer (#11932),并在室温下孵育 30 分钟。
  4. 用 1X PBS 清洗三次,每次 5 分钟。
  5. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  6. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  7. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  8. 4°C 温度下孵育过夜
  9. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  10. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 以及带 DAPI (#8961) 的 Prolong® Gold AntiFade Reagent 盖住切片。
  11. 为达到最佳效果,应立即采用适当的激发波长检测标本。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布于 2011 年 2 月

实验步骤编号:6

特异性/敏感性

E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) 可识别内源水平的内皮钙粘素总蛋白。该抗体不与相关家族成员发生交叉反应,例如 N-cadherin。

物种反应性:

人, 小鼠

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

牛 , 犬 , 猪

来源/纯化

使用与人 E-cadherin 蛋白 Pro780 周围的序列相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

钙黏着蛋白是在其胞外结构域中含有大约 100 个残基的钙黏着蛋白重复序列的跨膜糖蛋白超家族。钙黏着蛋白介导钙依赖性细胞-细胞黏附,并在正常组织发育中发挥至关重要的作用 (1)。经典的钙黏着蛋白亚家族包括 N-、P-、R-、B- 和 E-钙黏着蛋白,以及约十个在黏附连接中存在的其他成员,黏附连接是一种在极化上皮细胞顶面的细胞结构。经典钙黏着蛋白的胞质结构域可与 β-联蛋白、γ-联蛋白(也称作斑珠蛋白)和 p120 联蛋白相互作用。β-联蛋白和 γ-联蛋白与 α-联蛋白结合, 并且 α-联蛋白将钙黏着蛋白-联蛋白复合体连接至肌动蛋白细胞骨架 (1,2)。β- 和 γ-联蛋白在连接复合体中发挥结构性作用,而 p120 可调节钙黏着蛋白黏附活性和转运 (1-4)。研究者认为 E-钙黏着蛋白是许多上皮癌侵润和生长的活性抑制蛋白 (1-3)。研究表明,除了上皮钙粘素丢失外,癌细胞的神经钙粘素表达上调。钙粘素表达的这种变化被称作“钙粘素转换”。N-钙黏着蛋白与 FGF 受体协作,导致 MMP-9 过表达和细胞侵袭 (3)。研究表明,在内皮细胞中,VE-钙黏着蛋白信号转导、表达和定位与血管通透性和肿瘤血管生成相关 (5,6)。研究者还已经证实,正常情况下在上皮细胞中的存在的 P-钙黏着蛋白,其表达在卵巢和其他人类癌症中也发生改变 (7,8)。

  1. Wheelock, M.J. and Johnson, K.R. (2003) Annu Rev Cell Dev Biol 19, 207-35.
  2. Christofori, G. (2003) EMBO J 22, 2318-23.
  3. Hazan, R.B. et al. (2004) Ann N Y Acad Sci 1014, 155-63.
  4. Bryant, D.M. and Stow, J.L. (2004) Trends Cell Biol 14, 427-34.
  5. Rabascio, C. et al. (2004) Cancer Res 64, 4373-7.
  6. Yamaoka-Tojo, M. et al. (2006) Arterioscler Thromb Vasc Biol 26, 1991-7.
  7. Patel, I.S. et al. (2003) Int J Cancer 106, 172-7.
  8. Sanders, D.S. et al. (2000) J Pathol 190, 526-30.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
DRAQ5 是 Biostatus Limited 的注册商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料偶联抗体经 Life Technologies Corporation 许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列结合使用。Alexa Fluor® 染料(除 Alexa Fluor® 430 染料外)是待审批的授权专利。Alexa Fluor® 是 Molecular Probes, Inc 的注册商标。
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