DC-SIGN (D7F5C) XP^® Rabbit mAb (PE Conjugate) #71481

针对直接接合物的胞外表位实验步骤（流式细胞术）

A. 溶液和试剂

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS)：要制备 1 L 1X PBS：添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
2. 4% 甲醛，不含甲醇 (#47746)，可选
3. 抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或在 100 ml 1X PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5% BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活性染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品页，了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com，了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。

注意：理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

B. 固定

注意：如果需要活细胞染色，则继续进行第 C 条。

1. 进行离心使细胞沉淀，并去除上清液。
2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛的密度重悬细胞。混匀以解离沉淀物，并阻止个别细胞出现交联。
3. 在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。
4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 1X PBS 中重悬细胞。

C. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。（通常，每次实验 5 x 10⁵ 至 1 x 10⁶ 个细胞。）
2. 进行离心使细胞沉淀，并去除上清液。
3. 在 100 µl 稀释的抗体偶联物（按照建议的稀释度用抗体稀释缓冲液制备）中重悬细胞。
4. 在室温 (20-25°C) 下孵育 30-60 分钟。
5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞，并在流式细胞分析仪上进行分析。