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71481
DC-SIGN (D7F5C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
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DC-SIGN (D7F5C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) #71481

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Flow Cytometry Image 1: DC-SIGN (D7F5C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)

使用 DC-SIGN (D7F5C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)（实线）和浓度匹配的同型对照 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE Conjugate) #5742（虚线），对未分化（蓝色）或经 TPA 处理后再经 TPA (12-O-十四酰佛波-13-乙酯) #4174 （80 nM，过夜）和 Human Interleukin-4 (hIL-4) #8919（100 ng/ml，48 小时）处理而分化（绿色）的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。

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71481S		 100 µl （50 次测试）

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支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写：

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE)，并可对人体细胞进行了直接的流式细胞术分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联 DC-SIGN (D7F5C) XP® Rabbit mAb #13193 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS（pH 为 7.2）、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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针对直接接合物的胞外表位实验步骤（流式细胞术）

A. 溶液和试剂

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS)：要制备 1 L 1X PBS：添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 4% 甲醛，不含甲醇 (#47746)，可选
  3. 抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或在 100 ml 1X PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5% BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活性染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品页，了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com，了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。

注意：理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

B. 固定

注意：如果需要活细胞染色，则继续进行第 C 条。

  1. 进行离心使细胞沉淀，并去除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛的密度重悬细胞。混匀以解离沉淀物，并阻止个别细胞出现交联。
  3. 在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。
  4. 用足够的 1X PBS 离心洗涤。将上清液丢弃在合适的废液缸中。在 1X PBS 中重悬细胞。

C. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。（通常，每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。）
  2. 进行离心使细胞沉淀，并去除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的抗体偶联物（按照建议的稀释度用抗体稀释缓冲液制备）中重悬细胞。
  4. 在室温 (20-25°C) 下孵育 30-60 分钟。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞，并在流式细胞分析仪上进行分析。

发布​于 2009 年 1 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号：180

特异性/敏感性

DC-SIGN (D7F5C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) 可识别内源水平的 DC-SIGN 总蛋白。该抗体不与 DC-SIGNR 发生交叉反应。

物种反应性：

人

来源/纯化

使用与人 DC-SIGN 蛋白的羧基末端附近残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

DC-SIGN（CD209、CLEC4L）是由树状突细胞 (DCs) 表达的 C 型凝集素受体 (1,2)。DC-SIGN 转录物可经历多个剪切事件以产生至少十三种不同跨膜型和可溶型同工型 (3)。DC-SIGN 由于能识别甘露糖和果糖类可以和广泛类型的病原体发生反应，并且在 HIV 感染中的作用而被充分研究。DC-SIGN 对 HIV 包膜糖蛋白 gp120 的识别导致 DCs 对 HIV 的内化，且促进病毒向 CD4+ T 细胞的传播 (2,4)。DC-SIGN 还通过与 ICAM-3 的相互作用将黏附介导至 T 细胞且通过与 ICAM-2 的结合介导跨内皮变移 (1,5)。DC-SIGN 受体可以通过激活激酶 Raf-1 来调节 TLR 信号转导 (6,7)。与 DC-SIGNR 密切相关的分子（L-SIGN、CLEC4M）与 DC-SIGN 有77% 同源性并且可能通过基因重复事件而产生(8)。与 DC-SIGN 类似地，DC-SIGNR 也可结合病原体表面上的甘露糖 (8,9)。但是两中受体的表达模式不同，DC-SIGNR 仅限于在肝、淋巴结和胎盘的内皮细胞中表达 (10)。鼠细胞含有一组相关分子 SIGNR1-SIGNR8 (11)。基于序列分析未明确发现与人 DC-SIGN 同源的小鼠同源基因，但是 SIGNR3 在功能上最为相似，原因在于它能可识别甘露糖和果糖结构 (11)。

  1. Geijtenbeek, T.B. et al. (2000) Cell 100, 575-85.
  2. Geijtenbeek, T.B. et al. (2000) Cell 100, 587-97.
  3. Mummidi, S. et al. (2001) J Biol Chem 276, 33196-212.
  4. Kwon, D.S. et al. (2002) Immunity 16, 135-44.
  5. Geijtenbeek, T.B. et al. (2000) Nat Immunol 1, 353-7.
  6. Gringhuis, S.I. et al. (2007) Immunity 26, 605-16.
  7. Gringhuis, S.I. et al. (2010) Nat Immunol 11, 419-26.
  8. Bashirova, A.A. et al. (2001) J Exp Med 193, 671-8.
  9. Mitchell, D.A. et al. (2001) J Biol Chem 276, 28939-45.
  10. Pöhlmann, S. et al. (2001) Proc Natl Acad Sci U S A 98, 2670-5.
  11. Powlesland, A.S. et al. (2006) J Biol Chem 281, 20440-9.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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