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8172
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体
R
重组

Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8172

引用 (11)
筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)
使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)(红色)对未经处理(左图)或已经 Staurosporine #9953(1 μM,4 小时;右图)处理的 Hela 细胞进行免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 488 phalloidin #8878(绿色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
To Purchase # 8172S
目录# 规格 价格 库存
8172S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

这种 Cell Signaling Technology 抗体偶联于 Alexa Fluor® 594荧光染料,并针对人细胞中免疫荧光分析接受内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb #9579 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号:182

特异性/灵敏度

仅当 caspase-3 蛋白在 Asp175 位点被裂解活化时,Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) 才能识别出内源水平的 caspase-3 蛋白。通过对固定冷冻组织中健康细胞(如胰腺 α 细胞)的特定亚型进行免疫荧光分析可能会观察到非特异性标记。在大鼠和猴样本中可能会观察到胞核背景。

物种反应性:

人, 小鼠

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

大鼠, 牛 , 犬 , 猪

来源/纯化

使用与人 caspase-3 蛋白 Asp175 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Caspase-3(CPP-32、Apopain、Yama、SCA-1)是细胞凋亡的关键执行者,因为它部分或完全负责许多关键蛋白的蛋白水解剪切,例如核酶聚(ADP-核糖)聚合酶 (PARP) (1)。caspase-3 的激活需要经过其未活化的酶原形式转变为活化的 p17 和 p12 片段的蛋白水解过程。caspase-3 的剪切需要位于 P1 位点的天门冬氨酸残基 (2)。

通路

探索与本品相关的通路。

限制使用

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