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64786
CD8α (2.43) Rat mAb (APC Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

CD8α (2.43) Rat mAb (APC Conjugate) #64786

引用 (0)
筛选器:
  1. IF
  2. F
Immunofluorescence Image 1: CD8α (2.43) Rat mAb (APC Conjugate)
对使用 CD8α (2.43) Rat mAb (APC Conjugate)(左图,红色)标记以及使用 CD3 (17A2) Rat mAb (FITC Conjugate) #86603(右图,绿色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)共同标记的固定冷冻的小鼠脾脏进行共聚焦免疫荧光分析。
Flow Cytometry Image 1: CD8α (2.43) Rat mAb (APC Conjugate)
以浓度匹配的大鼠 (LTF-2) 单克隆抗体 IgG2b 同型对照 (APC 偶联物) #34828(虚线)作为对照,使用 CD8α (2.43) 大鼠单克隆抗体 (APC 偶联物)(实线)对活的小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 64786S
目录# 规格 价格 库存
64786S
100 µg

支持性数据

反应性 M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 Rat IgG2b

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

这种 Cell Signaling Technology 抗体偶联于别藻蓝素 (APC),并针对小鼠细胞中直接流式细胞分析接受内部检测。

产品使用信息

为获得最佳的流式细胞术结果,我们建议每次检测使用 0.125 μg 抗体。

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:50 - 1:200
流式细胞术(固定/通透) 1:160
流式细胞术(活性) 1:160

保存

保存在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3 和 0.1% 明胶中(pH 为 7.2)。保存在 4°C 下时,本产品可保持稳定 12 个月。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

直接偶联抗体的流式细胞术 Triton™ X-100 透化实验步骤

A. 溶液与试剂

本实验步骤中所需的所有试剂均可与我公司的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Triton™ X-100) #51995 一并高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 4% 甲醛,无甲醇 (#47746)
  3. 细胞透化缓冲液:购买即用型 (#39487) ,或要配制 10 ml,请添加 30 µl Triton™ X-100 到 10 ml 抗体稀释液。4°C 保存。
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释液 (#13616),或要配制 100 ml,请在 100 ml 1X PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998)。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 固定与透化

:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。

:如果表位遭甲醛和/或 Triton™ X-100 破坏,则可在固定前添加靶向 CD 标志物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛重悬细胞。混匀以解离沉淀物并防止各个细胞交联。
  3. 室温 (20-25°C) 固定 15 分钟。
  4. 通过离心用过量 1X PBS 洗涤。将上清液弃于合适的废液缸中。
  5. 在每一百万个细胞约 100 μl 细胞透化缓冲液中重悬细胞。
  6. 在室温孵育 10 分钟。
  7. 继续进行染色或将细胞在 PBS 中 -4°C 保存过夜。

C. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次检测用 5x105 至 1x106 个细胞)。
  2. 将细胞离心,弃去清液。
  3. 在 100 µl 稀释的抗体偶联物中重悬细胞,抗体偶联物在抗体稀释缓冲液中按建议的或如通过滴定确定的稀释度配制。
  4. 室温 (20-25°C) 孵育 1 小时。避光。
  5. 在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 1X PBS 中重悬细胞,在流式细胞分析仪上分析。

发布​时间 2017 年 1 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:1344

流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

特异性/灵敏度

CD8α (2.43) 大鼠单克隆抗体 (APC 偶联物) 可检测 CD8α 总蛋白的内源水平。该抗体可检测细胞外结构域中的表位。

物种反应性:

小鼠

来源/纯化

通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。

背景

分化簇 8 (CD8) 是一种二硫键连接的异二聚体,异二聚体由不相关的 α 和 β 亚基组成。每个亚基是一个糖蛋白,包含一个胞外 Ig 样结构域、一个多肽连接肽、一个跨膜区域和一个短的胞浆尾区。T 细胞中 CD8 是 T 细胞受体 (TCR) 的共同受体,这两个不同的结构可识别抗原-主要组织相容性复合体 (MHC)。具体而言,CD8α 的 Ig 样结构域与 MHC I 类分子的 α3 结构域相互作用。CD8 可确保 TCR 和抗原相互作用的特异性,并延长 T 细胞和抗原呈递细胞之间的接触时长,α 链能募集酪氨酸激酶 Lck,这对于 T 细胞激活非常重要 (1)。
  1. Zamoyska, R. (1994) Immunity 1, 243-46.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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