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23308
CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
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CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #23308

引用 (0)
筛选器：
  1. IHC
  2. IF
Immunohistochemistry Image 1: CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)（红色）和 DAPI #4083（蓝色）对石蜡包埋的人尿路上皮癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunofluorescence Image 1: CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)（红色）对 THP-1 细胞（左图，阳性）和 Jurkat 细胞（右图，阴性）进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
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23308S		 100 µl （50 次检测）

定制制剂

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体与 Alexa Fluor® 555 荧光染料接合，并经内部测试，可用于人体细胞的直接免疫荧光分析。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb #76437 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学（石蜡） 1:50 - 1:200
免疫荧光法（免疫细胞化学） 1:100

保存

保存在 PBS（pH 为 7.2）、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫组织化学（石蜡）

A. 溶液与试剂

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 乙醇，无水变性，组织学分级（100% 和 95%）。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 洗涤缓冲液：
    1. 含 Tween®20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液 (TBST)：要配制 1L 1X TBST，添加 100 ml 含 Tween®20 (TBST)(#9997) 的 10 X Tris 盐缓冲液至 900 ml dH20 中，混合。
    2. 1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：要配制 1L 1X PBS，添加 100 ml 10X 洗涤缓冲液、磷酸盐缓冲盐水 (#12528) 到 900 ml dH20 中，混合。
  5. SignalStain® Antibody Diluent: (#8112)
  6. 1X EDTA 修复液：要配制 250 mL 1X EDTA 修复液，用 225 ml dH2O 稀释 25 ml SignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X) (#14747)。
  7. 3% 过氧化氢：要制备，添加10 ml 30% H2O2至90 ml dH2O 中。
  8. 封闭液：1X TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum：要制备 5 ml 1X TBST，添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：要制备4 mL 的 dH2O，添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  9. Prolong® Gold AntiFade Reagent(#9071)、Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI(#8961)。
  10. （可选）TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (#92401)。

B. 脱蜡/复水

注意：在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤：
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次，每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

C. 抗原修复

  1. 在微波炉中加热浸于 1X EDTA 修复液的切片直至开始沸腾为止；继而在亚沸腾温度 (95°-98°) 持续 15 分钟。无需冷却。

    2. D. 染色

    1. 用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 分钟。
    2. 在 1X TBST 中孵育切片 5 分钟。
    3. 在每个切片上滴加 100–400 µl 首选封闭液，在室温下封闭 1 小时。
    4. 移除封闭液，并向每张切片添加稀释于 SignalStain® Antibody Diluent 中的 100-400 µl 一抗。
    5. 在 4°C 过夜孵育。
    6. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟，使其避光。
      注：请参阅下文，了解可选的 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂实验步骤。
    7. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI，用盖玻片盖住切片。
    8. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。为长期储存，将切片在 4°C 避光平放储存。

    TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂实验步骤

    按照 D 部分步骤 6：

    重要提示：TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂与去垢剂不兼容。任何涉及去垢剂的步骤必须在施加 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 之前完成。

    1. 通过在 70% 乙醇中 1:20 稀释来配制 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 溶液。涡旋混合。注：猝灭液应在用前新鲜配制，且若沉淀物可见则丢弃。我们建议在稀释前将装有 TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂的 20X DMF 原液加热至 70°，以免形成沉淀物。
    2. 立即用 100 µL - 200 µL 猝灭溶液在室温覆盖组织切片 30 秒。重要提示：请勿让切片干透。切片可以耐受更长的孵育（长达 3 分钟），只要它们保持水化即可。
    3. 在转移到 1X PBS 之前，在吸水毛巾上轻拍切片以归集多余 TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂。
    4. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
    5. 继续进行复染/封片。

实验步骤编号：2924

免疫荧光法（免疫细胞化学）

A. 溶液与试剂

注意：用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 甲醇，100%
  4. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100)：要配制 10 ml：添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中，混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  5. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (9998)，并混合。
  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体，随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。注意：甲醛有毒性，仅可在通风橱中使用
  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸去固定液，用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 甲醇通透步骤：在细胞上覆盖冰冷的 100% 甲醇（使用足够的甲醇完全覆盖至 3–5 mm，不要让其干燥），并在 –20°C 下用甲醇孵育 10 分钟，同时用 1X PBS 漂洗 5 分钟。
  2. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  3. 封闭时，按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  4. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  5. 4°C 温度下孵育过夜。
  6. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  7. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 以及带 DAPI (#8961) 的 Prolong® Gold AntiFade Reagent 盖住切片。
  8. 为达到最佳效果，立即以适当的激发波长检测标本。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2010 年 12 月

实验步骤编号：220

特异性/灵敏度

CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 可检测 CD68 总蛋白的内源水平。

物种反应性：

人

来源/纯化

通过采用重组人 CD68 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

CD68 （巨噬唾液酸蛋白）是由单核细胞和巨噬细胞表达并且常用作其标志物的重度糖基化的跨膜蛋白 (1,2)。它存在于质膜以及内体膜和溶酶体膜上 (1-3)。据称它结合 OxLDL 并且已被观察为同型二聚体形式 (3,4)。

有限使用

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