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35840
CD45.1 (A20) Mouse mAb (PE Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

CD45.1 (A20) Mouse mAb (PE Conjugate) #35840

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筛选器:
  1. F
Flow Cytometry Image 1: CD45.1 (A20) Mouse mAb (PE Conjugate)
使用 CD45.1 (A20) Mouse mAb (PE Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Mouse Isotype Control (PE Conjugate)(虚线)对 C57BL/6 脾脏(蓝色)和 SJL 脾脏(绿色)进行流式细胞分析。
To Purchase # 35840S
目录# 规格 价格 库存
35840S
100 µg

支持性数据

反应性 M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 Mouse IgG2a kappa

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 PE,并在内部对小鼠细胞进行了直接的流式细胞分析检测。

产品使用信息

为获得最佳的流式细胞术结果,我们建议每次检测使用 0.5 μg 抗体。

应用 稀释度
流式细胞术(活性) 1:40

保存

保存在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3 和 0.1% 明胶(pH 为 7.2)中。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

特异性/灵敏度

CD45.1 (A20) Mouse mAb (PE Conjugate) 可识别总 CD45.1 蛋白的内源水平,并且不会与 CD45.2 发生交叉反应。该抗体可检测细胞外结构域中的表位。

物种反应性:

小鼠

来源/纯化

通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。

背景

蛋白质磷酸酶 (PTP) 受体 CD45 是 I 型跨膜蛋白,包括选择性剪切产生的一对胞内酪氨酸磷酸酶结构域和可变胞外结构域 (1)。CD45 的催化活性随第一磷酸酶结构域 (D1) 变化而变化,而第二磷酸酶结构域 (D2) 可以与第一结构域相互作用并使其稳定,或募集/结合底物 (2,3)。CD45 与抗原受体复合体蛋白直接相互作用,或激活涉及调节 T 细胞和 B 细胞抗原受体信号转导的 Src 家族激酶 (1)。具体而言,CD45 使 Src-家族激酶 Lck 和 Fyn 在其保守的阴性调节羧基末端酪氨酸残基处去磷酸化,并上调激酶活性。相反,研究显示,CD45 还可以通过在正向调节性自磷酸化位点去磷酸化,抑制 Lck 和 Fyn。CD45 似乎是传导信号的正向调节分子和负向调节分子,视具体刺激和细胞类型进行信号转导 (1)。淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞等人体白细胞表达 CD45,而红细胞和血小板为 CD45 表达阴性 (4)。
鼠 CD45 糖蛋白具有三个已在近交小鼠中分类的等位基因(Ly5aLy5bLy5c)。Ly6aLy6b,也称为 CD455.1 和 CD455.2,可基于与特异性单克隆抗体的反应性来分别区分。常见的小鼠品系包括 BALB/c、C57BL、CBA/J 和 NZB/BLNJ 表达 CD45.2,其中 SJL/J 小鼠表达 CD45.1(5)。
  1. Huntington, N.D. and Tarlinton, D.M. (2004) Immunol Lett 94, 167-74.
  2. Felberg, J. and Johnson, P. (2000) Biochem Biophys Res Commun 271, 292-8.
  3. Kashio, N. et al. (1998) J Biol Chem 273, 33856-63.
  4. Wang, Y. and Johnson, P. (2005) J Biol Chem 280, 14318-24.
  5. Zebedee, S.L. et al. (1991) Dev Immunol 1, 243-54.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

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