反应性 | H M |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 大鼠 IgG2b、kappa |
产品信息
为获得最佳的流式细胞术结果,我们建议每次检测使用 0.25μg 抗体。
应用 | 稀释度 |
---|---|
流式细胞术(固定/通透) | 1:80 |
流式细胞术(活性) | 1:80 |
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
注:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。
注:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
发布时间 2017 年 6 月
修订时间 2022 年 1 月
实验步骤编号:1504
人, 小鼠
通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。
CD44 是 I 型跨膜糖蛋白,可通过对透明质酸 (HA) 的亲和力并可能通过胞外基质 (ECM) 的其他部分,介导细胞-细胞相互作用和细胞-基质相互作用。CD44 呈高度多态性,具有多种选择性剪切变体, 经受广泛的翻译后修饰 (1,2)。CD44 的表面水平升高是 T 细胞活化的特征,并且该蛋白质的表达在炎症反应期间上调。研究已经证实, CD44 和 HER2 之间的相互作用与卵巢癌细胞生长的增长相关 (1-3)。CD44 与埃兹蛋白、根蛋白和膜突蛋白 (ERM) 相互作用,使肌动蛋白细胞骨架与质膜和 ECM 连接 (4-6)。在静息细胞中,CD44 在 Ser325 处组成型磷酸化。PKC 的激活导致 Ser291 磷酸化、Ser325 去磷酸化、埃兹蛋白从 CD44 解离和定向运动性 (4)。
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