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46328
CD4 (RM4-5) Rat mAb (APC-Cy7® Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

CD4 (RM4-5) Rat mAb (APC-Cy7® Conjugate) #46328

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  1. F
Flow Cytometry Image 1: CD4 (RM4-5) Rat mAb (APC-Cy7® Conjugate)
以浓度匹配的大鼠同型对照 (APC-Cy7® 偶联物)(虚线)作为对照,使用 CD4 (RM4-5) 大鼠单克隆抗体 (APC-Cy7® 偶联物)(实线)对活的小鼠脾细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 46328S
目录# 规格 价格 库存
46328S
100 µg

支持性数据

反应性 M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 大鼠 IgG2a、kappa

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 APC-Cy7®,并在内部对小鼠细胞进行了直接流式细胞分析检测。

产品使用信息

为获得最佳的流式细胞术结果,我们建议每次检测使用 0.25 μg 抗体。

应用 稀释度
流式细胞术(活性) 1:80

保存

保存在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3 和 0.1% 明胶中(pH 为 7.2)。保存在 4°C 下时,本产品可保持稳定 12 个月。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

特异性/灵敏度

CD4 (RM4-5) 大鼠单克隆抗体(APC-Cy7® 偶联物)可检测内源水平的 CD4 总蛋白。该抗体可检测细胞外结构域中的表位。

物种反应性:

小鼠

来源/纯化

通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。

背景

分化抗原簇 4 (CD4) 是一种糖蛋白,包含一个氨基末端胞外域(四个结构域:D1-D4,呈现出 Ig 样结构)、一个跨膜域以及一个短胞质尾区。CD4 表达于 T 辅助细胞、调节性 T 细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞的表面,并在 T 细胞的发育和激活方面起着重要作用。在 T 细胞上,CD4 是 T 细胞受体 (TCR) 的辅助受体,并且这两种不同的结构可识别抗原–主要组织相容性复合物 (MHC)。具体而言,CD4 的 D1 结构域与 MHC II 类分子的 β2-结构域相互作用。CD4 可确保 TCR 抗原相互作用的特异性,延长 T 细胞与抗原呈递细胞之间的接触,并募集 T 细胞激活所必需的酪氨酸激酶 Lck (1)。

限制使用

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