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86936
CD3ε (D7A6E™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体
R
重组

CD3ε (D7A6E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #86936

引用 (0)
筛选器:
  1. IHC
使用 CD3ε (D7A6E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(绿色)和 DAPI #4083(蓝色)对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
To Purchase # 86936S
目录# 规格 价格 库存
86936S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology® 的这种抗体在最合适的条件下与 Alexa Fluor® 488 荧光染料偶联。该抗体偶联物显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 CD3ε (D7A6E) XP® Rabbit mAb #85061 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学(石蜡) 1:100 - 1:400

保存

保存在 PBS (pH 为7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫组织化学(石蜡)

A. 溶液与试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯
  2. 乙醇,无水变性,组织学分级(100% 和 95%)。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 洗涤缓冲液
    1. 含 Tween®20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液 (TBST):要配制 1L 1X TBST,添加 100 ml 含 Tween®20 (TBST)(#9997) 的 10 X Tris 盐缓冲液至 900 ml dH20 中,混合。
    2. 1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS):要配制 1L 1X PBS,添加 100 ml 10X 洗涤缓冲液、磷酸盐缓冲盐水 (#12528) 到 900 ml dH20 中,混合。
  5. SignalStain® Antibody Diluent: (#8112)
  6. 1X EDTA 修复液:要配制 250 mL 1X EDTA 修复液,用 225 ml dH2O 稀释 25 ml SignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X) (#14747)。
  7. 3% 过氧化氢:要制备,添加10 ml 30% H2O2至90 ml dH2O 中。
  8. 封闭液:1X TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum:要制备 5 ml 1X TBST,添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution:要制备4 mL 的 dH2O,添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  9. Prolong® Gold AntiFade Reagent(#9071)、Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI(#8961)。
  10. (可选)TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (#92401)。

B. 脱蜡/复水

注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤:
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次,每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95 乙醇中孵育切片 2 次,每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次,每次 5 分钟。

C. 抗原修复

  1. 在微波炉中加热浸于 1X EDTA 修复液的切片直至开始沸腾为止;继而在亚沸腾温度 (95°-98°) 持续 15 分钟。无需冷却。
  2. D. 染色

    1. 用 dH2O 清洗切片三次,每次 5 分钟。
    2. 在 1X TBST 中孵育切片 5 分钟。
    3. 在每个切片上滴加 100–400 µl 首选封闭液,在室温下封闭 1 小时。
    4. 移除封闭液,并向每张切片添加稀释于 SignalStain® Antibody Diluent 中的 100-400 µl 一抗。
    5. 在 4°C 过夜孵育。
    6. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟,使其避光。
      注:请参阅下文,了解可选的 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂实验步骤。
    7. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI,用盖玻片盖住切片。
    8. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。为长期储存,将切片在 4°C 避光平放储存。

    TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂实验步骤

    按照 D 部分步骤 6:

    重要提示:TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂与去垢剂不兼容。任何涉及去垢剂的步骤必须在施加 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 之前完成。

    1. 通过在 70% 乙醇中 1:20 稀释来配制 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 溶液。涡旋混合。:猝灭液应在用前新鲜配制,且若沉淀物可见则丢弃。我们建议在稀释前将装有 TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂的 20X DMF 原液加热至 70°,以免形成沉淀物。
    2. 立即用 100 µL - 200 µL 猝灭溶液在室温覆盖组织切片 30 秒。重要提示:请勿让切片干透。切片可以耐受更长的孵育(长达 3 分钟),只要它们保持水化即可。
    3. 在转移到 1X PBS 之前,在吸水毛巾上轻拍切片以归集多余 TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂。
    4. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
    5. 继续进行复染/封片。

实验步骤编号:2924

特异性/灵敏度

CD3ε (D7A6E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可识别 CD3ε 总蛋白的内源水平。该抗体可识别人 CD3ε 蛋白,也可与小鼠 CD3ε 发生反应; 但是,不建议将该抗体用于小鼠组织的免疫组织化学分析。

物种反应性:

来源/纯化

通过采用与人 CD3ε 蛋白的 Glu178 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

当 T 细胞经 T 细胞受体 (TCR) 遭遇抗原时,抗原数量和性质信息将中继至胞内信号转导装置 (1)。该激活过程主要取决于直接与 TCR 结合的多亚基蛋白质复合体 CD3(分化抗原簇 3)。CD3 由四种多肽组成:ζ、γ、ε 和 δ。这些多肽各自含有至少一个基于免疫受体酪氨酸的激活基序 (ITAM) (2)。TCR 复合体与外来抗原的接合在 ITAM 基序中诱导酪氨酸磷酸化,并且磷酸化的 ITAM 作为信号转导分子(如 ZAP-70 和 PI-3 激酶的 p85 亚基)的对接位点发挥作用 (3,4)。TCR 连接还在 CD3ε 中诱导构象变化,从而一个脯氨酸区暴露并且随后与接头蛋白 Nck 缔合 (5)。

通路

探索与本品相关的通路。

有限使用

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
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