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42777
CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体
R
重组

CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #42777

引用 (1)
筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
使用 CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(绿色)对 HUVEC(左图,阳性)和 HeLa 细胞(右图,阴性)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
To Purchase # 42777S
目录# 规格 价格 库存
42777S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 小鼠 IgG1、kappa

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体与 Alexa Fluor® 488 荧光染料接合,并经内部测试,可用于人体细胞的直接免疫荧光分析。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 CD31 (PECAM-1) (89C2) 小鼠单克隆抗体 #3528 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:200 - 1:800

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号:182

特异性/灵敏度

CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可检测 CD31 总蛋白的内源水平。它不与其他相关蛋白发生交叉反应。

物种反应性:

来源/纯化

使用人重组 CD31 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

CD31(血小板内皮细胞黏附分子 1:PECAM-1)是细胞黏附分子 Ig 超家族的一员,它在循环血小板、单核细胞、中性粒细胞、某些 T 细胞和内皮细胞中表达,可调节细胞黏附、上皮细胞迁移和血管生成 (1)。在受到不同刺激(如机械或氧化应激)时,假定受到 Src 家族成员的刺激,CD31 在细胞质羧基末端尾区的 Tyr686 位点被磷酸化 (2)。酪氨酸磷酸化可介导与许多 SH2 包含结构域结合伴侣的结合,如 PI3 激酶、SHIP、PLCγ 和 SHP-2。因此,CD31 可作为多种信号转导分子的支架蛋白 (3)。

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