反应性 | M |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 大鼠 IgG2b、kappa |
产品信息
为获得最佳的流式细胞术结果,我们建议每次检测使用 0.5 μg 抗体。
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(冰冻) | 1:50 - 1:200 |
流式细胞术(固定/通透) | 1:40 |
流式细胞术(活性) | 1:40 |
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。
注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2013 年 11 月
实验步骤编号:222
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
注:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。
注:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
发布时间 2017 年 6 月
修订时间 2022 年 1 月
实验步骤编号:1504
小鼠
通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。
当 T 细胞经 T 细胞受体 (TCR) 遭遇抗原时,抗原数量和性质信息将中继至胞内信号转导装置 (1)。该激活过程主要取决于直接与 TCR 结合的多亚基蛋白质复合体 CD3(分化抗原簇 3)。CD3 由四种多肽组成:ζ、γ、ε 和 δ。这些多肽各自含有至少一个基于免疫受体酪氨酸的激活基序 (ITAM) (2)。TCR 复合体与外来抗原的接合在 ITAM 基序中诱导酪氨酸磷酸化,并且磷酸化的 ITAM 作为信号转导分子(如 ZAP-70 和 PI-3 激酶的 p85 亚基)的对接位点发挥作用 (3,4)。TCR 连接还在 CD3ε 中诱导构象变化,从而一个脯氨酸区暴露并且随后与接头蛋白 Nck 缔合 (5)。
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