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88560
CD20 (2H7) Mouse mAb (violetFluor™ 450 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

CD20 (2H7) Mouse mAb (violetFluor 450 Conjugate) #88560

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筛选器:
  1. F
Flow Cytometry Image 1: CD20 (2H7) Mouse mAb (violetFluor™ 450 Conjugate)
以浓度匹配的 Mouse Isotype Control (violetFluor 450 Conjugate)(虚线)作为对照,使用 CD20 (2H7) Mouse mAb (violetFluor 450 Conjugate)(实线)对活性人外周血单核细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 88560S
目录# 规格 价格 库存
88560S
500 µl (100 次检测)

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 小鼠 IgG2b、kappa

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 violetFluor™ 450,并在内部对人细胞进行了直接的流式细胞分析检测。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术(固定/通透) 1:20
流式细胞术(活性) 1:20

保存

保存在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3 和 0.1% 明胶中(pH 为 7.2)。保存在 4°C 下时,本产品可保持稳定 12 个月。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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使用 FoxP3/转录因子固定/通透试剂盒进行流式细胞术分析

该抗体在使用 FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Kit #43481 的流式细胞术中进行了验证。如需了解详细说明,请参阅该试剂盒随附的实验方案。

实验步骤编号:1804

流式细胞术,针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

:如果使用全血,则需裂解红血细胞,并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

:人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白(例如,巨噬细胞/单核细胞谱系)时,在用兔抗体进行免疫染色之前,用人 Fc 块预孵育活细胞。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号:1504

特异性/灵敏度

CD20 (2H7) 小鼠单抗(violetFluor™ 450 偶联物)可检测 CD20 总蛋白的内源水平。该抗体可检测细胞外结构域中的表位。

物种反应性:

来源/纯化

通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。

背景

B 淋巴细胞抗原 CD20(也称为 MS4A1;跨膜结构域 4 亚家族 A 成员 1)是参与调节 B 细胞激活和增殖的细胞表面磷酸化蛋白 (1,2)。它通常用作识别 B 细胞的标志物,在整个 B 细胞发育过程中表达,直到它们分化成为浆细胞。CD20 没有已知配体,其表达和功能在人和小鼠之间很大程度上保守 (1-3)。有证据表明,CD20 对于钙池调控钙离子通道 (SOC) 进入是必要的,这将导致 B 细胞激活所需的细胞质钙水平升高 (4,5)。抗 CD20 抗体免疫疗法通过激活天然单核细胞网来消耗 B 细胞,是 B 细胞淋巴瘤、白血病和自身免疫性疾病和常用疗法 (6)。
该 2H7 抗体广泛用来检测正常和恶性 B 细胞 (7)。
  1. Stashenko, P. et al. (1980) J Immunol 125, 1678-85.
  2. Tedder, T.F. et al. (1985) J Immunol 135, 973-9.
  3. Tedder, T.F. et al. (1988) J Immunol 141, 4388-94.
  4. Bubien, J.K. et al. (1993) J Cell Biol 121, 1121-32.
  5. Li, H. et al. (2003) J Biol Chem 278, 42427-34.
  6. Uchida, J. et al. (2004) J Exp Med 199, 1659-69.
  7. Liu, A.Y. et al. (1987) J Immunol 139, 3521-6.

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