CD14 (61D3) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5^® Conjugate) #99811

流式细胞术，针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液和试剂

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS)：要制备 1 L 1X PBS：添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
2. 抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活性染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品页，了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com，了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

注意：如果使用全血，则需裂解红血细胞，并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

注意：理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。（通常，每次实验 5 x 10⁵ 至 1 x 10⁶ 个细胞。）
2. 进行离心使细胞沉淀，并去除上清液。
3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光保存。
5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。