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CD14 (61D3) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)
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CD14 (61D3) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate) #99811

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Flow Cytometry Image 1: CD14 (61D3) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)

以浓度匹配的 Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (PerCP-Cy5.5® Conjugate) #24589（虚线）作为对照，使用 CD14 (61D3) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)（实线）对活的人外周血单核细胞进行流式细胞分析。对单核细胞门中的细胞进行分析。

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99811S		 500 µl （100 次测试）

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支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 小鼠 IgG1

应用缩写：

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 PerCP-Cy5.5®，并在内部对人细胞进行了直接的流式细胞分析检测。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:20

保存

保存在 10 mM NaH2PO4、150 mM NaCl、0.09% NaN3、0.1% 明胶 (pH 7.2) 中。保存在 4oC 下时，本产品可保持稳定 6 个月。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术，针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液和试剂

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲液 (PBS)：要制备 1 L 1X PBS：添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。
  2. 抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5 % BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。

注意：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活性染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品页，了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com，了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

注意：如果使用全血，则需裂解红血细胞，并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

注意：理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。

  1. 将所需数量的细胞分装进试管或加样孔中。（通常，每次实验 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。）
  2. 进行离心使细胞沉淀，并去除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，稀释的一抗按建议的稀释度或根据滴定确定用抗体稀释缓冲液制备。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光保存。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。丢弃上清液。重复操作。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​于 2017 年 6 月 

修订于 2020 年 6 月

实验步骤编号：1504

特异性/敏感性

CD14 (61D3) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate) 可检测 CD14 总蛋白的内源水平。该抗体可检测细胞外结构域中的表位。

物种反应性：

人

来源/纯化

对组织培养上清液进行亲和层析纯化即可获得该单克隆抗体。该纯化抗体在最佳条件下与从制备过程中分离出来的未反应染料偶联。

背景

CD14 是一种含亮氨酸富集重复序列的模式识别受体，其表达多限于单核细胞/巨噬细胞系 (1)。研究表明，CD14 是一种细菌脂多糖 (LPS) 结合糖蛋白，可表达为 GPI 相关膜蛋白或可溶性血浆蛋白 (2)。LPS 会诱导 GPI 相关 CD14 表达上调，可在细菌感染下促进 TLR4 信号转导和巨噬细胞激活 (3-5)。

61D3 抗体广泛用来检测单核细胞/巨噬细胞系的细胞 (6)。

  1. Wright, S.D. et al. (1991) J Exp Med 173, 1281-6.
  2. Ziegler-Heitbrock, H.W. and Ulevitch, R.J. (1993) Immunol Today 14, 121-5.
  3. Suzuki, M. et al. (2009) J Immunol 182, 6485-93.
  4. Pugin, J. et al. (1994) Immunity 1, 509-16.
  5. Zanoni, I. et al. (2011) Cell 147, 868-80.
  6. Flora, P.K. and Gregory, C.D. (1994) Eur J Immunol 24, 2625-32.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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