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31411
Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #31411

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Immunofluorescence Image 1: Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
对使用 Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)(左图,红色)标记以及使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #8617(右图,绿色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)共同标记的固定冷冻的小鼠结肠进行共聚焦免疫荧光分析。
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Immunofluorescence Image 2: Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
对使用 Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)(左图,红色)标记以及使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #8617(右图,伪彩蓝色)和 Ras (E4K9L) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #64520(右图,伪彩绿色)共同标记的固定冷冻的小鼠心脏进行共聚焦免疫荧光分析。
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Immunofluorescence Image 3: Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
对使用 Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)(左图,红色)标记以及使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #8617(右图,伪彩蓝色)和 Ras (E4K9L) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #64520(右图,伪彩绿色)共同标记的固定冷冻的小鼠骨骼肌进行共聚焦免疫荧光分析。
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Immunofluorescence Image 1: Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
对使用 Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)(左图,红色)标记以及使用 DyLight 488 Phalloidin #12935(右图,绿色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)进行共同标记的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
Immunofluorescence Image 2: Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
对使用 Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)(左图,红色)标记以及使用 DyLight 488 Phalloidin #12935(右图,绿色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)进行共同标记的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
Flow Cytometry Image 1: Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
使用 Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #2985(虚线)对 HeLa 细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 31411S
目录# 规格 价格 库存
31411S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H M R Hm Mk B Dg
灵敏度
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体在最佳条件下与 Alexa Fluor® 647荧光染料偶联,并在内部进行了测试,可用于人类细胞的直接流式细胞分析以及人类和小鼠细胞及小鼠组织的免疫荧光分析。该抗体偶联的物种交叉反应性预计与非偶联的 Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb #3267相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:100 - 1:400
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:50 - 1:100
流式细胞术(固定/通透) 1:50

保存

保存在 PBS (pH 为7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号:182

流式细胞术,针对直接偶联抗体的甲醇透化实验步骤

A. 溶液与试剂

本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):若要制备 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 4% 甲醛,无甲醇 (#47746)
  3. 100% 甲醇 (#13604):用前冷却
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 固定

:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。

:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛重悬细胞。混匀以解离沉淀物并防止各个细胞交联。
  3. 室温 (20-25°C) 固定 15 分钟。
  4. 通过离心用过量 1X PBS 洗涤。将上清液弃于合适的废液缸中。以 0.5-1 ml 1 X PBS 重悬细胞。继续进行透化步骤。
    1. 或者,细胞可在 1X PBS 中 4°C 保存过夜。

C. 透化

  1. 通过温和涡旋混合的同时,向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇终浓度,使细胞透化。
  2. 在冰上透化最短 10 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞 在 90% 甲醇中 -20°C 保存。

D. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心以过量 1X PBS 洗涤分离,以去除甲醇。将上清液弃于合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 室温孵育 1 小时。避光。
  5. 在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上分析。

发布​时间 2009 年 7 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:407

特异性/灵敏度

Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 可识别 caveolin-1 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠, 仓鼠 , 猴, 牛 , 犬

来源/纯化

使用与人小窝蛋白 1 中 Glu20 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

21-24 kDa 整合蛋白 caveolins 是胆固醇/神经鞘脂富含的质膜微区小窝的主要结构组分。根据不同的组织分布,已识别出小窝蛋白家族的三个成员(caveolin-1、2 和 3)。小窝蛋白可形成与胆固醇和其他脂质相互作用的异源和同源低聚体 (1)。小窝蛋白参与调节不同的生物功能,包括囊泡运输、胆固醇稳态、细胞黏附和凋亡,也和神经退行性疾病有关联 (2)。小窝蛋白和多种信号转导分子相互作用,例如 Gα 亚基、酪氨酸激酶受体、PKC、Src 家族酪氨酸激酶和 eNOS (1,2)。小窝蛋白被认为可作为融合信号转导的支架蛋白。小窝蛋白在 Tyr14 位点的磷酸化对小窝蛋白结合包含 SH2 或 PTB 结构域的接头蛋白非常重要,如 GRB7 (3-5)。Ser80 位点的磷酸化可调控小窝蛋白,使其与 ER 膜结合,然后进入分泌通路 (6)。
  1. Okamoto, T. et al. (1998) J Biol Chem 273, 5419-22.
  2. Smart, E.J. et al. (1999) Mol Cell Biol 19, 7289-304.
  3. Nomura, R. et al. (1999) Mol. Biol. Cell 10, 975-986.
  4. Volonte, D. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276, 8094-8103.
  5. Lee, H. et al. (2000) Mol Endocrinol 14, 1750-75.
  6. Schlegel, A. et al. (2001) J Biol Chem 276, 4398-408.

通路与蛋白质

探索与本产品相关的通路 + 蛋白质。

限制使用

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