反应性 | All |
灵敏度 | 转染性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 小鼠 IgG2b |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:50 |
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。
注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2013 年 11 月
实验步骤编号:182
预期的所有物种
使用对 Cas9 (金黄色葡萄球菌)蛋白的氨基末端具有特异性的重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 是一种 RNA 引导的 DNA 核酸酶,并且是化脓性链球菌 CRISPR 抗病毒免疫系统的组成部分,该系统提供针对外部染色体遗传物质的适应性免疫 (1)。CRISPR 抗病毒作用机制涉及三个步骤:(i) 通过宿主细菌取得外来 DNA;(ii) CRISPR RNA (crRNA) 的合成和成熟,随后形成 RNA-Cas 核酸酶蛋白质复合体;和 (iii) 通过该复合体识别外来 DNA 以及由 Cas 核酸酶活性的剪切作用进行定向干扰 (2)。II 型 CRISPR/Cas 抗病毒免疫系统可提供强有力的基因组精确编辑工具,并且具有特异性调节基因和治疗性应用的潜力 (3)。在细胞中必须引入或表达 Cas9 蛋白和引导 RNA(包含 crRNA 和反式激活 crRNA (tracrRNA) 之间的融合)。引导 RNA 5' 末端的一个 20 核苷酸序列,可以把 Cas9 引导至特定的 DNA 靶标位点。因此,可“编程” Cas9 以便在体外及在细胞和生物中切割多种 DNA 位点。CRISPR/Cas9 基因组编辑工具已经用于许多生物体中,包括小鼠和人类细胞 (4,5)。研究显示,CRISPR 可以用来在啮齿类和灵长类胚胎干细胞中产生突变等位基因或报告基因 (6-8)。
Cas9(金黄色葡萄球菌) 是一种较小但有效的 Cas9 同源基因,就像更常使用的 Cas9 同源基因 Cas9(酿脓链球菌)一样 (9)。
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