反应性 | H M R |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:50 |
流式细胞术(固定/通透) | 1:50 |
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2010 年 12 月
实验步骤编号:220
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠
使用与人钙网蛋白氨基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
钙是一种参与许多细胞功能的通用信号转导分子,如细胞运动、代谢、蛋白质修饰、蛋白质折叠和细胞凋亡。钙存储在内质网 (ER) 中,在内质网内通过钙离子结合分子伴侣(如钙联蛋白和钙网蛋白)缓冲,并通过 IP 3 受体通道释放 (1)。钙网蛋白也作为内质网的分子伴侣起作用,以确保新合成糖蛋白的正确折叠和质量控制。因此,推测钙网蛋白不会改变蛋白质的折叠,而是在恰当的时间点调节有效折叠和亚基组装。此外,在内质网中,钙网蛋白以非天然构象保存蛋白质,并对其进行靶向降解 (2,3)。
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