反应性 | H M R |
敏感性 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/亚型 | 兔 IgG |
产品信息
Cell Signaling Technology 的这种抗体与 Alexa Fluor® 594 荧光染料相偶联 ,并通过对人细胞的流式细胞分析和对人和小鼠细胞的免疫荧光分析,进行了内部检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb #12238 相同。
应用 | 稀释度 |
---|---|
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:100 |
流式细胞术 | 1:50 |
保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。
注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布于 2006 年 11 月
修订于 2010 年 12 月
实验步骤编号:220
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
注意:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活性染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经流式细胞术验证的细胞染料完整列表。
注:固定前,应分离黏附细胞或组织,并放在单细胞悬浮液中。
注意:理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀。
注意:如果使用全血,则需在固定前裂解红细胞并通过离心洗涤。
注意:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中,这类抗体保持结合目的靶标。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布于 2009 年 7 月
修订于 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
Calreticulin (D3E6) XP® 兔单抗 (Alexa Fluor® 594 偶联物) 可检测内源水平的总钙网蛋白。
人, 小鼠, 大鼠
使用与人钙网蛋白氨基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
钙是一种参与许多细胞功能的通用信号转导分子,如细胞运动、代谢、蛋白质修饰、蛋白质折叠和细胞凋亡。钙存储在内质网 (ER) 中,在内质网内通过钙离子结合分子伴侣(如钙联蛋白和钙网蛋白)缓冲,并通过 IP 3 受体通道释放 (1)。钙网蛋白也作为内质网的分子伴侣起作用,以确保新合成糖蛋白的正确折叠和质量控制。因此,推测钙网蛋白不会改变蛋白质的折叠,而是在恰当的时间点调节有效折叠和亚基组装。此外,在内质网中,钙网蛋白以非天然构象保存蛋白质,并对其进行靶向降解 (2,3)。
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