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33452
C/EBPβ (E2K1U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

C/EBPβ (E2K1U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #33452

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  1. F
Flow Cytometry Image 1: C/EBPβ (E2K1U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
使用 C/EBPβ (E2K1U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #2975(虚线)对 TT 细胞(蓝色,阴性表达)和 U-87 MG 细胞(绿色,高表达)进行流式细胞分析。
To Purchase # 33452S
目录# 规格 价格 库存
33452S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H Mk
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体在最合适的条件下接合 Alexa Fluor® 488荧光染料,并可对人细胞进行直接的流式细胞分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 C/EBPβ (E2K1U) Rabbit mAb #43095 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS (pH 为7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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直接偶联抗体的流式细胞术 Triton™ X-100 透化实验步骤

A. 溶液与试剂

本实验步骤中所需的所有试剂均可与我公司的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Triton™ X-100) #51995 一并高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):要配制 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 4% 甲醛,无甲醇 (#47746)
  3. 细胞透化缓冲液:购买即用型 (#39487) ,或要配制 10 ml,请添加 30 µl Triton™ X-100 到 10 ml 抗体稀释液。4°C 保存。
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释液 (#13616),或要配制 100 ml,请在 100 ml 1X PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998)。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 固定与透化

:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。

:如果表位遭甲醛和/或 Triton™ X-100 破坏,则可在固定前添加靶向 CD 标志物或其他胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛重悬细胞。混匀以解离沉淀物并防止各个细胞交联。
  3. 室温 (20-25°C) 固定 15 分钟。
  4. 通过离心用过量 1X PBS 洗涤。将上清液弃于合适的废液缸中。
  5. 在每一百万个细胞约 100 μl 细胞透化缓冲液中重悬细胞。
  6. 在室温孵育 10 分钟。
  7. 继续进行染色或将细胞在 PBS 中 -4°C 保存过夜。

C. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次检测用 5x105 至 1x106 个细胞)。
  2. 将细胞离心,弃去清液。
  3. 在 100 µl 稀释的抗体偶联物中重悬细胞,抗体偶联物在抗体稀释缓冲液中按建议的或如通过滴定确定的稀释度配制。
  4. 室温 (20-25°C) 孵育 1 小时。避光。
  5. 在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 1X PBS 中重悬细胞,在流式细胞分析仪上分析。

发布​时间 2017 年 1 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:1344

特异性/灵敏度

C/EBPβ (E2K1U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可识别 C/EBPβ 总蛋白的内源水平。该抗体不与 C/EBPα 蛋白发生交叉反应。

物种反应性:

人, 猴

来源/纯化

使用与人 C/EBPβ 蛋白中 Gly67 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

C/EBPβ 是 CCAAT/增强子结合蛋白 (C/EBP) 转录因子家族的成员之一,对细胞分化和功能至关重要 (1)。有各种 N-末端截短的 C/EBPβ 同工型:全长 C/EBPβ、C/EBPβ-LAP(肝富集活化蛋白)和 C/EBPβ-LIP(肝增强抑制蛋白)。在三阴性乳腺癌细胞中,显示有氧糖酵解控制 C/EBPβ-LAP 的表达,这又刺激粒细胞集落刺激因子 (G-CSF) 和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)的表达。这些因子从癌细胞中分泌,促进肿瘤微环境中的髓源性抑制细胞 (MDSC) 发育,从而抑制抗肿瘤免疫性(2)。此外,研究表明,C/EBPβ-LIP 表达降低会延迟小鼠中的年龄相关表型,表明 C/EBPβ-LIP 在衰老中的潜在角色(3)。
  1. Lekstrom-Himes, J. and Xanthopoulos, K.G. (1998) J Biol Chem 273, 28545-8.
  2. Li, W. et al. (2018) Cell Metab 28, 87-103.e6.
  3. Müller, C. et al. (2018) Elife 7, pii: e34985. doi: 10.7554/eLife.34985.

通路与蛋白质

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