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15798
Brd2 (D89B4) Rabbit mAb (Biotinylated)
抗体偶联物
单克隆抗体
R
重组

Brd2 (D89B4) Rabbit mAb (Biotinylated) #15798

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筛选器:
  1. WB
Western Blotting Image 1: Brd2 (D89B4) Rabbit mAb (Biotinylated)
使用 Brd2 (D89B4) Rabbit mAb (Biotinylated) 对 HeLa 和 MDA-MB-231 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
To Purchase # 15798S
目录# 规格 价格 库存
15798S
100 µl

支持性数据

反应性 H M
灵敏度 内源性
MW (kDa) 110
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体在最合适的条件下偶联生物素。该生物素化抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Brd2 (D89B4) Rabbit mAb #5848 相同。
MW (kDa) 110

产品使用信息

应用 稀释度
蛋白质印迹法 1:1000

保存

保存在 136 mM NaCl、2.6 mM KCI、12 mM 磷酸氢二钠(pH 为 7.4)、2 mg/ml BSA 和 50 % 甘油中。-20℃ 保存。切勿分装抗体。‭

实验步骤

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蛋白质印迹法实验步骤

为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。

注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。

A. 溶液与试剂

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):(#9808) 若要制备 1 L 1X PBS:将 50 ml 20X PBS 添加至 950 ml dH2O,混合。
  2. 10 X Tris 缓冲盐水 (TBS):(#12498) 若要配制 1 L 1X TBS:将 100 ml 10X 添加至 900 ml dH2O ,混合。
  3. 1X SDS 样品缓冲液:Blue Loading Pack (#7722) 或 Red Loading Pack (#7723) 通过将 1/10 体积的 30X DTT 添加至 1 体积的 3X SDS 样品缓冲液,配制新鲜的 3X 还原性上样缓冲液。用 dH2O 稀释至 1X。
  4. 10X Tris-Glycine SDS 电泳缓冲液:(#4050) 若要配制 1 L 1X 电泳缓冲液: 将100 ml 10X 电泳缓冲液添加至 900 ml dH2O ,混合。
  5. 10X Tris-Glycine 转移缓冲液:(#12539) 要制备 1 L 1X 转移缓冲液:将 100 ml 10X 转移缓冲液添加至 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中,并混合。
  6. 含有 Tween® 20 (TBST) 的 10 X Tris 盐缓冲液:(#9997) 要制备 1 L 1X TBST: 将 100 ml 10X TBST 添加至 900 ml dH2O 中并混合。
  7. 脱脂奶粉:(#9999)。
  8. 封闭缓冲液:含 5% w/v 脱脂奶粉的 1X TBST;要制备 150 ml,将 7.5 g 脱脂奶粉添加至 150 ml 1X TBST 中并充分混匀。
  9. 洗涤缓冲液:(#9997) 1X TBST。
  10. 牛血清白蛋白 (BSA): (#9998)。
  11. 一抗稀释缓冲液:含 5% BSA 的 1X TBST;要制备 20 ml,添加 1.0 g BSA 至 20 ml 1X TBST,然后充分混匀。
  12. Biotinylated Protein Ladder Detection Pack:(#7727)。
  13. Blue Prestained Protein Marker, Broad Range (11-250 kDa): (#59329)。
  14. 印迹膜:(#12369) 本实验步骤针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常推荐 0.2 µm 孔径。
  15. Streptavidin-HRP:(#3999)。
  16. 检测试剂:SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。

B. 蛋白质印迹

制备样品的常规流程。

  1. 添加含有调节因子的新鲜培养基,使其对细胞进行处理一段时间。
  2. 从培养物中吸出培养基;用 1X PBS 洗涤细胞;吸出。
  3. 加入 1X SDS 样品缓冲液(6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径的平板 500 µl)来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移至微量离心管。置于冰上。
  4. 超声处理 10–15 秒以完成细胞裂解并剪切 DNA(以降低样品粘度)。
  5. 取 20 µl 样品,在 95–100°C 下加热 5 分钟;放在冰上冷却。
  6. 微量离心机内离心 5 分钟。
  7. 上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。

    注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。

  8. 电转至硝酸纤维素膜 (#12369)。

C. 膜封闭和抗体孵育

注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。

I. 膜封闭

  1. (可选)转移之后,在室温下用 25 ml TBS 将硝酸纤维素膜洗涤 5 分钟。
  2. 将膜置于 25 ml 封闭缓冲液中,在室温下孵育 1 小时。
  3. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。

II. 一抗孵育

  1. 将膜和一抗(按照产品网页中建议的适当稀释度)置于 10 ml 一抗稀释缓冲液中在 4°C 下孵育过夜并不时轻轻晃动。
  2. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。
  3. 将膜与 Streptavidin-HRP (#3999 以适宜的稀释度)在室温下于 10 ml 封闭缓冲液中孵育 1 小时并不时轻轻晃动。
  4. 用 15ml TBST 洗涤三次,每次 5 分钟。
  5. 继续进行检测(D 部分)。

请勿加入用于检测生物素化蛋白标准品的 Anti-biotin, HRP-linked Antibody。没有必要。Streptavidin-HRP 也将会使生物素化标准品可视化。

D. 蛋白质检测

使用说明:

  1. 在 TBST 中清洗与膜结合的 HRP (Antibody Conjugate) 三次,持续 5 分钟。
  2. 通过稀释一部分 2X 试剂 A 和一部分 2X 试剂 B(例如:要制备 10 ml,则添加 5 ml 试剂 A 和 5 ml 试剂 B),来制备 1X SignalFire™ ECL Reagent (#6883)。混匀。
  3. 将底物与膜一起孵育 1 分钟,倒掉多余溶液(膜将保持湿润),然后包裹在塑料中并在 X 线胶片下曝光。

* 避免反复接触皮肤。

发布​时间 2005 年 6 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:266

特异性/灵敏度

Brd2 (D89B4) Rabbit mAb (Biotinylated) 可检测 Brd2 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 小鼠

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

大鼠, 猴

来源/纯化

使用与人 Brd2 蛋白 Ala310 周围的残基对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Brd2 是溴结构域蛋白 BET 亚家族的高度保守成员,该亚家族包含两个串联氨基末端溴结构域和一个羧基末端额外末端 (ET) 结构域 (1)。除了通过结合多个 E2F 参与引导细胞周期基因的表达 (2),Brd2 还表明与多种转录调节因子有关,包括 TFIID 和 Swi/Snf 复合体 (3,4)。Brd2 首先被鉴定为细胞核丝氨酸/苏氨酸激酶 (2)。像其他溴结构域蛋白一样,Brd2 通过调节染色质结构和转录在哺乳动物发育过程中发挥作用 (5)。Brd2 已表明通过乙酰化 Lys12 结合组蛋白 H4,组蛋白 H4 是多种组蛋白乙酰转移酶转录共激活因子的底物 (6)。在小鼠中,Brd2 在胚胎形成期间以及在成年睾丸、卵巢和大脑中均具有最高的表达水平 (3,7,8)。由于神经管关闭缺陷,缺乏 Brd2 的小鼠胚胎会显示发育延迟和最终死亡 (5)。Brd2 基因启动子的突变与青少年肌阵挛性癫痫 (JME) 易感性升高有关 (9)。

限制使用

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