反应性 | H M |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
流式细胞术(固定/通透) | 1:50 |
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
人, 小鼠
使用与人 BLNK 蛋白 Arg282 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
B 细胞连接蛋白 (BLNK) 也称 SLP-65 或 BASH,是一个接头蛋白分子,在 B 细胞激活和 B 细胞抗原受体 (BCR) 结合中发挥重要作用。BLNK 在 BCR 相关的 Syk 和下游信号转导级联之间发挥作用 (1,2)。BLNK 在氨基末端有多个 SH2 结合基序 (YXXP),在羧基末端有一个 SH2 结构域。结合 BCR 后,BLNK 在多个 YXXP 基序上被 Syk 磷酸化,包括 Tyr72、Tyr84、Tyr96 和 Tyr178 (1)。这些磷酸化基序为信号转导分子(如 BTK、PLCγ 和 Vav)提供停泊位点。这些信号转导分子通过它们的 SH2 结构域结合 BLNK,并一同激活下游信号转导通路 (3,4)。通过其 SH2 结构域,BLNK 还能与酪氨酸磷酸化的靶标蛋白(如 HPK1)相互作用,从而募集到 BCR 复合体以进行信号转导 (5)。
探索与本品相关的通路。
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