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5612
β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #5612

引用 (1)
筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)

使用 β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)(红色)和 Histone H3 Antibody(绿色),对 HeLa(左图)和 NCI-H28(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。

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5612S
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支持数据

反应性 H
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 小鼠 IgG1

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Vir- Virus
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 555荧光染料,并对人细胞进行了免疫荧光内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联的 β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (IF Preferred) #2677 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(免疫细胞化学) 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。请不要分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(免疫细胞化学)

A. 溶液和试剂

注意:用反渗透去离子 (RODI) 水或等效净化水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 通透缓冲液 (1X PBS/0.2% Triton X-100):
    要配制 25 ml,添加 2.5 ml 10X PBS 到 22.5 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 50 µl Triton X-100。
  4. Image-iT™ FX Signal Enhancer (#11932)
  5. 封闭缓冲液(1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清(例如 Normal Goat Serum (#5425))和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O 中并充分混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  6. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (9998),并混合。
  7. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注: 细胞应在多孔板、室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用
  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸去固定液,用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在通透缓冲液中室温通透处理细胞 5 分钟。
  2. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  3. 滴 3-4 滴 Image-iT™ FX Signal Enhancer (#11932),并在室温下孵育 30 分钟。
  4. 用 1X PBS 清洗三次,每次 5 分钟。
  5. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  6. 封闭时,按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  7. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  8. 4°C 温度下孵育过夜
  9. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  10. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 以及带 DAPI (#8961) 的 Prolong® Gold AntiFade Reagent 盖住切片。
  11. 为达到最佳效果,应立即采用适当的激发波长检测标本。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布于 2011 年 2 月

实验步骤编号:6

特异性/敏感性

β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 可检测内源水平的 β-catenin 总蛋白。

物种反应性:

基于 100% 序列同源性预测发生反应的物种:

小鼠, 大鼠, 猴, 猪

来源/纯化

使用与人 β-catenin 蛋白的羧基末端相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

β-Catenin是 Wnt 信号转导通路中的一个关键下游效应分子 (1)。它与脊椎动物的两个重要生物过程有关:早期胚胎发育 (2) 和肿瘤形成 (3)。CK1 可以在 Ser45 位点使 β-Catenin 磷酸化。该磷酸化会导致 β-Catenin 随后能被 GSK-3β 磷酸化 (4-6)。GSK-3β 通过在 Ser33、Ser37 和 Thr41 位点磷酸化 β-Catenin以将其降解 (7)。这些位点发生突变会提高 β-Catenin 的稳定性,并且已在多种肿瘤细胞系中发现了这些突变 (8)。

  1. Cadigan, K.M. and Nusse, R. (1997) Genes Dev 11, 3286-305.
  2. Wodarz, A. and Nusse, R. (1998) Annu Rev Cell Dev Biol 14, 59-88.
  3. Polakis, P. (1999) Curr Opin Genet Dev 9, 15-21.
  4. Amit, S. et al. (2002) Genes Dev 16, 1066-76.
  5. Liu, C. et al. (2002) Cell 108, 837-47.
  6. Yanagawa, S. et al. (2002) EMBO J 21, 1733-42.
  7. Yost, C. et al. (1996) Genes Dev 10, 1443-54.
  8. Morin, P.J. et al. (1997) Science 275, 1787-90.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

限制使用

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
本产品中的 Alexa Fluor 染料偶联抗体经 Life Technologies Corporation 许可销售,仅供研究使用,不可与 DNA 微阵列结合使用。Alexa Fluor® 染料(除 Alexa Fluor® 430 染料外)是待审批的授权专利。Alexa Fluor® 是 Molecular Probes, Inc 的注册商标。
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