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31211
Asparagine Synthetase (E6C2C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
抗体偶联物
单克隆抗体

Asparagine Synthetase (E6C2C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) #31211

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Flow Cytometry Image 1: Asparagine Synthetase (E6C2C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
使用 Asparagine Synthetase (E6C2C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE Conjugate) #5742(虚线)对 Loucy 细胞(蓝色)和 K-562 细胞进行流式细胞分析。
To Purchase # 31211S
目录# 规格 价格 库存
31211S
100 µl (50 次检测)

支持性数据

反应性 H M R
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词:

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合藻红蛋白 (PE),并可对人细胞进行直接的流式细胞分析内部检测。该抗体的物种交叉反应性预计与非偶联 Asparagine Synthetase (E6C2C) XP® Rabbit mAb #92479 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术,针对直接偶联抗体的甲醇透化实验步骤

A. 溶液与试剂

本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。

:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS):若要制备 1 L 1X PBS:将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水,混合。
  2. 4% 甲醛,无甲醇 (#47746)
  3. 100% 甲醇 (#13604):用前冷却
  4. 抗体稀释缓冲液:购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616),或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 固定

:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。

:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。

:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。

  1. 通过离心使细胞沉淀下来,移除上清液。
  2. 按每 100 万个细胞大约 100 µl 4% 甲醛重悬细胞。混匀以解离沉淀物并防止各个细胞交联。
  3. 室温 (20-25°C) 固定 15 分钟。
  4. 通过离心用过量 1X PBS 洗涤。将上清液弃于合适的废液缸中。以 0.5-1 ml 1 X PBS 重悬细胞。继续进行透化步骤。
    1. 或者,细胞可在 1X PBS 中 4°C 保存过夜。

C. 透化

  1. 通过温和涡旋混合的同时,向预冷的细胞中缓慢添加冰冷的 100% 甲醇至 90​% 甲醇终浓度,使细胞透化。
  2. 在冰上透化最短 10 分钟。
  3. 继续进行细胞免疫染色(D 部分)或将细胞 在 90% 甲醇中 -20°C 保存。

D. 免疫染色

:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。(通常,每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。)
  2. 通过离心以过量 1X PBS 洗涤分离,以去除甲醇。将上清液弃于合适的废液缸中。如有必要,可重复进行。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞,这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 室温孵育 1 小时。避光。
  5. 在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞,并在流式细胞分析仪上分析。

发布​时间 2009 年 7 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号:407

特异性/灵敏度

Asparagine Synthetase (E6C2C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate) 可识别天冬酰胺合成酶总蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

使用与人天冬酰胺合成酶蛋白中 Gly473 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

天冬酰胺合成酶 (ASNS) 催化天冬氨酸和谷氨酰胺合成天冬酰胺。研究表明,在大量人肿瘤中,细胞内天冬酰胺会抑制细胞凋亡。此外,ASNS 表达水平与患者的胶质瘤和神经母细胞瘤进展有关 (1)。而且,急性淋巴细胞性白血病细胞缺乏 ASNS,因此其存活常常依赖于血清天冬酰胺 (2)。因此,L-天冬酰胺酶剥夺天冬酰胺已被开发作为急性淋巴细胞白血病的治疗方法 (2,3)。在胃癌和肝癌亚组中,ASNS 启动子过度甲基化与 ASNS 低表达相关,使这些癌细胞对天冬酰胺酶处理敏感 (4)。
  1. Zhang, J. et al. (2014) Mol Cell 56, 205-18.
  2. Li, H. et al. (2019) Nat Med 25, 850-60.
  3. Nakamura, A. et al. (2018) Proc Natl Acad Sci U S A 115, E7776-E7785.

通路与蛋白质

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