反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
流式细胞术(固定/通透) | 1:50 |
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
人
使用与人 ARC 蛋白的 Pro125 周围的残基对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体,人 ARC 蛋白的 Pro125周围的残基是 NOL32 基因的同工型某一编码区域特有的。
具有 caspase 召集结构域的凋亡阻遏蛋白 (ARC),也被独立地鉴定为肌肉富集的胞质蛋白 (MYP),是一种调控凋亡的 CARD 结构域蛋白 (1)。ARC 蛋白 CARD 结构域与其他细胞死亡调节物(包括caspase-2、caspase-9、RAIDD 和 Apaf-1)中的结构域高度同源 (2)。NOL3 基因既编码胞质 ARC 蛋白,也编码一种参与 RNA 剪接的 30 kDa 核仁蛋白 (Nop30)。ARC 从 NOL3的亚型 2 编码,而通过选择性剪切产生的亚型 1 编码 Nop30。ARC 蛋白和 Nop30 蛋白有相同的氨基末端序列 (3)。调查研究表明,ARC 可以与胱天蛋白酶-8 和胱天蛋白酶-2 结合并通过参与受体蛋白 Fas、TNFR1、和 DR3 的內源通路抑制凋亡 (1)。进一步的研究表明,ARC 抗凋亡机制可能既包含固有(线粒体)通路也包含外来(死亡受体)通路 (4)。除结合 caspase 之外,ARC 还可以破坏与死亡结构域 Fas 和 FADD 的相互作用,这会抑制死亡诱导信号转导复合体 (DISC) 装配。ARC 的 CARD 结构域可以通过与促凋亡蛋白 Bax 结合来抑制固有凋亡 (5)。要导引 ARC 至线粒体,需要肌酸激酶 2 在 Thr149 位点磷酸化 ARC (6)。ARC 能够抑制程序性坏死,后者是一种在阻断向 TNFR1 召集 RIP1 时会触发的编程坏死通路 (7)。ARC 蛋白的表达在正常条件下主要见于终末分化的细胞中并且可在多种癌中被明显诱导,包括胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、肝癌、肾癌、黑色素瘤和急性髓性白血病(1、8-12)。
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