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82941
AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
偶联抗体
单克隆抗体

AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #82941

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筛选器:
  1. IF
Immunofluorescence Image 1: AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

使用 AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(绿色)和 Myelin Basic Protein (D8X4Q) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #30103(红色)对小鼠小脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。

Immunofluorescence Image 2: AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

使用 AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(绿色)对小鼠结肠细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™ 554 Phalloidin #13054(红色)标记。样品用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封装。

Immunofluorescence Image 3: AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

使用 AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)(绿色)对小鼠肾脏细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™ 554 Phalloidin #13054(红色)标记。样品用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封装。

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支持数据

反应性 H M R
敏感性 内源性
MW (kDa)
来源/亚型 兔 IgG

应用缩写:

  • W-Western
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术
  • E-P-ELISA 肽

物种交叉反应性缩写:

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴子
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-狗
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体偶联 Alexa Fluor® 488 荧光染料,并在内部对小鼠组织进行了直接的流式细胞分析检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb #59678 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法(冰冻) 1:50

保存

保存在 PBS(pH 为 7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。储存在 4°C。不要分装抗体,避光保存,切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法(冰冻)

A. 溶液和试剂

注意:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS): (9808) 要制备 1L 1X PBS:添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛:16%,无甲醇,Polysciences 公司生产。(cat# 18814),使用新鲜制剂,小瓶打开后在 4°C 避光保存,同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100):要配制 10 ml:添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中,混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液: (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100):要制备 10 ml,添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后,添加 0.1 g BSA (#9998),并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071),Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色(C 部分)。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织,请立刻按下列步骤固定:
    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意:甲醛有毒性,仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次,每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作(C 部分)。

C. 免疫染色

注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时,按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液,加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次,每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ,用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果,使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下,可长期保存。

发布​于 2006 年 11 月 

修订于 2013 年 11 月

实验步骤编号:222

特异性/敏感性

AQP4 (D1F8E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 可检测 AQP4 总蛋白的内源水平。

物种反应性:

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

使用对人 AQP4 蛋白的羧基末端具有特异性的重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

水孔蛋白 (AQP) 是一类结合膜蛋白,作为水和小溶质跨膜转移的通道。AQP 有 13 种亚型,表达于不同类型的细胞和组织 (1,2)。AQP1 见于血管、肾脏、眼和耳。AQP2 见于肾脏,并且已表明 AQP2 缺乏会导致糖尿病 (1,3)。AQP4 见于大脑,在星形细胞中含量丰富 (1,2,4)。AQP5 见于唾液腺和泪腺,AQP6 见于肾脏细胞内囊泡, AQP7 见于脂细胞,AQP8 见于肾脏、睾丸和肝脏,AQP9 见于肝脏和白细胞,AQP10-11 见于肠内 (1,3,4)。AQP 对于细胞和器官功能至关重要。已表明 AQP1 和 AQP4 可调节星形细胞内的水稳态,以防止溶质失衡引起的脑水肿 (5)。几项研究表明,AQP 参与炎症过程的发生,包括先天性和适应性免疫细胞 (6,7)。

  1. Takata, K. et al. (2004) Prog Histochem Cytochem 39, 1-83.
  2. Echevarría, M. and Ilundáin, A.A. (1998) J Physiol Biochem 54, 107-18.
  3. Gomes, A. et al. (2018) Front Chem 6, 238.
  4. Xu, M. et al. (2017) Adv Exp Med Biol 969, 81-103.
  5. Kobayashi, H. et al. (2004) J Pharmacol Sci 96, 264-70.
  6. Meli, R. et al. (2018) Front Physiol 9, 101.
  7. Ishibashi, K. et al. (1998) Biochem Biophys Res Commun 244, 268-74.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
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