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YAP - Hippo 信号转导通路的介导物

YAP(Yes 相关蛋白,YAP65)是一种转录共激活蛋白,可用作 Hippo 抑癌基因通路的主要效应子。通过 YAP 进行的 Hippo 信号转导在某种程度上可调控干细胞和祖细胞的增殖活性,从而调控组织生长和器官大小。YAP 是一种有效的致癌基因,它的异常调控会引起肿瘤发生,据报道,YAP 在许多人肿瘤类型的细胞中表达升高。研究还表明,YAP 在细胞命运决定中起到重要作用。除了被报道能够促进上皮-间质细胞转换外 (1),YAP 经证实还能促进成熟肝细胞去分化成为肝脏祖细胞,表明 YAP 和 Hippo 信号转导在组织再生中起到重要作用 (2)。

  1. Lamar JM, Stern P, Liu H, Schindler JW, Jiang ZG, Hynes RO (2012) The Hippo pathway target, YAP, promotes metastasis through its TEAD-interaction domain. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109(37), E2441–50.
  2. Yimlamai D, Christodoulou C, Galli GG, Yanger K, Pepe-Mooney B, Gurung B, Shrestha K, Cahan P, Stanger BZ, Camargo FD (2014) Hippo pathway activity influences liver cell fate. Cell 157(6), 1324–38.

抗体性能比较

我们将我们的 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 与其他公司的 3 种 YAP 抗体进行了比较,发现我们的抗体在每次检测的应用中与其他抗体一样或更胜一筹。请参见下面的竞争产品比较数据,了解单独的应用。

蛋白质印迹法

使用我们的 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 和其他三种抗体(按建议的稀释度)对 YAP 阳性细胞(A-204、A549、MCF7)和 YAP 阴性细胞 (RL-7) 的提取物进行蛋白质印迹分析。

使用蛋白质印迹实验比较竞争产品和 YAP #14074
  • YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 在 YAP 阳性细胞中于相应的 YAP 分子量处形成一个条带,而在 YAP 阴性细胞中无条带,表明其对 YAP 敏感且特异。
  • 抗体 1 能对 YAP 产生强信号,但会高度与 50 kDa 蛋白发生交叉反应,表明该抗体对 YAP 不具特异性。
  • 在供应商建议的稀释度下,抗体 2 会对 YAP 产生微弱信号。
  • 在 YAP 阳性和 YAP 阴性细胞系中,抗体 3 显示出多种分子量的条带,表明该抗体对 YAP 不具特异性。

总结YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 表现出比其他抗体更高的特异性和敏感性。

在我们使用蛋白质印迹法检测的抗体中,仅 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 和抗体 2 兔单克隆抗体建议用于流式细胞术。我们使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 和抗体 2(按建议的稀释浓度)分析了 YAP 阳性 A-204 细胞(绿色)和 YAP 阴性 RL-7 细胞(蓝色)。使用流式细胞术比较竞争产品和 YAP #14074

  • YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 在阴性细胞和阳性细胞之间形成一个良好的荧光峰值强度的分隔,表明对 YAP 具有高特异性。
  • 在相同的仪器设置下,抗体 2 在 YAP 阳性细胞中产生较强信号,但在 YAP 阴性细胞中的背景信号更强,表明具有非特异性反应性。

总结YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 表现出比抗体 2 更高的特异性。

细胞沉淀物

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 和其他两家公司的抗体对石蜡包埋的 YAP 阳性 (PANC-1) 和 YAP 阴性 (RL-7) 细胞沉淀物进行 IHC 分析。

对阳性和阴性细胞沉淀物进行 IHC 来比较竞争产品和 YAP #14074

  • CST 的 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 在 YAP 阳性细胞中显示出较深的细胞浆和胞核染色,但在 YAP 阴性细胞中则没有染色,表明该抗体对 YAP 具有特异性。
  • 抗体 1 显示可在 YAP 阳性细胞中有相应染色,而在 YAP 阴性细胞中则没有染色。每次检测使用更多抗体,表明 #14074 比抗体 1 更敏感。
  • 抗体 3 按 1:4000 的比例对 YAP 阴性细胞染色,表明它对 YAP 不具特异性。使用 1:8000 的比例时,在 YAP 阴性细胞中可见极浅染色,但在 YAP 阳性细胞中信号还是会减弱。#14074 比抗体 3 更具有特异性且敏感度更高。

乳腺癌细胞

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074(建议稀释度)和其他公司的小鼠单克隆抗体(使用我们根据细胞沉淀物分析确定的最佳稀释度)对石蜡包埋的乳腺癌细胞进行 IHC 分析。

对乳腺癌细胞进行 IHC 来比较竞争产品和 YAP #14074

总结:使用细胞沉淀物和石蜡包埋的乳腺癌细胞时,我们证实了 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 在 IHC 检测中所产生的敏感性和特异性优于其他公司的抗体。

使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 和其他两家公司的抗体对 MCF10A 和 C2C12 细胞进行 IF-IC 分析。

MCF10A 人乳腺上皮细胞

免疫荧光竞争产品与 YAP #14074 的对比(MCF10A 细胞)

  • 抗体 1 的性能似乎与 #14074 同样地好,但需要更多抗体才能达到相似强度。
  • 在供应商建议的稀释度下,抗体 3 的染色非常浅。

C2C12 小鼠成肌细胞

免疫荧光竞争产品与 YAP #14074 的对比(C2C12 小鼠细胞)

  • CST 的 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 和抗体 1 会产生适当 YAP 染色,但在胞核没有染色。
  • 除了较浅的胞核染色之外,抗体 3 会使胞核出现较深的染色,表明在啮齿动物细胞模型中,这种抗体对 YAP 缺乏特异性。

总结:YAP (D8H1X) XP® 在人和小鼠细胞中有特异性,而抗体 3 则表明在啮齿动物细胞中出现非特异性染色。YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 的比活度高于抗体 1。此外,抗体 1 会强烈与使用蛋白质印迹法检测到的 50 kDa 蛋白发生交叉反应,它还可能与使用免疫荧光法检测到的这种蛋白发生交叉反应。

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