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Caspase 3 信号转导

细胞凋亡是一种程序性细胞死亡,以核固缩、胞核凝缩、细胞皱缩、膜起泡和 DNA 碎裂为特征。Caspase 是半胱氨酸蛋白酶的一族,是细胞凋亡的中心调节分子。启动子 caspase(包括 caspase-2、-8、-9、-10、-11 和 -12)与促凋亡信号紧密结合。一旦被激活,启动 Caspase 便会裂解活化并激活下游效应子 Caspase(包括 Caspase-3、-6 和 -7),这些下游效应子 Caspase 反过来通过裂解活化靶向细胞蛋白质执行细胞凋亡。

 
#9579 IF

Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb #9579

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb #9579(绿色)对未经处理(左图)或已经 Staurosporine #9953(1 μM,4 小时;右图)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
#9661 IHC

Cleaved Caspase-3 (Asp175) Antibody #9661

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Antibody #9661 对冰冻的 H1650 异种移植物切片进行免疫组织化学分析。
#9664 WB

Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb #9664

使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb #9664 对未经处理或已经 staurosporine #9953(1 uM,3 小时)或 依托泊苷 #2200(25 uM,5 小时)(如图)处理的 C6(大鼠)、NIH/3T3(小鼠)和 Jurkat(人)细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

蛋白质印迹法

功能:激活 Caspase-3 需要将 Asp175 位点剪切为激活的 p17/p19 和 p12 蛋白片段。

样品:Jurkat 细胞用依托泊苷处理,依托泊苷是一种通常用来诱导细胞凋亡的抗癌剂。

使用 #9664 进行的蛋白质印迹比较

结果

  • CST 的 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb #9664 可识别剪切后的激活大片段(参见蛋白质印迹上的 17 kDa 和 19 kDa 双联体)。
  • 公司 1 裂解活化的 Caspase-3 兔多克隆抗体 显示高背景,并且无法检测预计 19/17 kDa 范围内的不同条带。
  • 公司 2 激活的 Caspase-3 兔多克隆抗体 可检测各种分子量的多种非特异性条带,但只能微弱地检测 19/17 kDa - 12 kDa 范围内的目的条带。使用该抗体获得的数据不具有决定性。
  CST #9664 竞争公司 1 竞争公司 2
产品 9664    
稀释度 1:1000 1:200* 1:500*
浓度 (μg/mL) 0.07 1 1

*制造商建议的起始稀释度。

蛋白质印迹法

功能:激活 Caspase-3 需要将 Asp175 位点剪切为激活的 p17/p19 和 p12 蛋白片段。

样品:Jurkat 细胞用依托泊苷处理,依托泊苷是一种通常用来诱导细胞凋亡的抗癌剂。C2C12 细胞用 Staurosporine 处理,Staurosporine 是一种诱导细胞凋亡的 PKC 抑制剂(1 μM,3 小时)。

使用 #9664 进行的蛋白质印迹比较

结果

  • CST 的 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb #9664 可识别剪切后的激活大片段(参见 17 kDa 和 19 kDa 双联体)。
  • 公司 1 激活的 Caspase-3 兔多克隆抗体 可检测各种分子量的多种非特异性条带。该抗体仅可识别 17 kDa 的条带,对应于裂解活化的 Caspase-3 的其中一种大片段。该抗体的非特异性结合可能会使数据分析很困难。
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