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在蛋白质印迹实验中验证抗体

蛋白质印迹法仍然是检测细胞或组织蛋白表达的一种最常见的科学方法。蛋白质印迹结果的准确性严重依赖于在免疫印迹实验中所使用的一抗的质量。Cell Signaling Technology (CST) 提供蛋白质印迹法所需的最高质量的一抗和二抗。CST™ 抗体按照严格的实验步骤进行内部生产和广泛验证。

验证步骤包括

  • 通过对多种已知表达水平的细胞系和/或组织进行检测,可准确测定物种交叉反应性,并验证特异性。
  • 细胞系用生长因子、化学激活剂或抑制剂(会诱导或抑制靶标表达)处理,以验证特异性。磷酸酶处理可确认磷酸化特异性。
  • 使用转染 siRNA 或敲除型细胞系来验证靶标特异性。
  • 批间进行一一比较,以确保批间一致性。
  • 预先决定最佳稀释度和缓冲液;指定阳性和阴性细胞提取物,还优化了详细的实验步骤,可节省宝贵的时间和试剂。
siRNA 转染或敲除(Bcl-xL #6362 和 #6363)

使用 Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb #2764(上图)或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125(下图)对转染 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® BcL-xL siRNA I #6362 (+) 或 SignalSilence® Bcl-xL siRNA II #6363 (+) 的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb 确定 Bcl-xL 表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则被用于上样对照。

对 293、NIH/3T3 和 C6 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370(上图)或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695(下图)对经 λ 磷酸酶或 TPA #4174(如图)处理的 293、NIH/3T3 和 C6 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。

使用 JIP4/SPAG9 (D72F4) XP Rabbit mAb #5519 对多种细胞系进行分析。

使用 JIP4/SPAG9 (D72F4) XP® Rabbit mAb #5519 对不同组织和细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。

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