Revision 1

#56175Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
LRSAM1 (D1O5S) Rabbit mAb 28405 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 89572 20 µl 28 kDa Rabbit IgG
NDP52 (D1E4A) Rabbit mAb 60732 20 µl 52, 60 kDa Rabbit IgG
TAX1BP1 (D1D5) Rabbit mAb 5105 20 µl 92 kDa Rabbit IgG
Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 8089 20 µl 66, 68 kDa Rabbit IgG
Phospho-Atg16L1 (Ser278) (E7K6H) Rabbit mAb 45511 20 µl 68 kDa Rabbit IgG
Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb 5483 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb 38066 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb 43566 20 µl 14, 16 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Xenophagy Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting selected targets involved in the process of xenophagy. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Xenophagy provides an important defense against foreign pathogens, such as bacteria and viruses, by targeting them for degradation through autophagy (1-3). Several well-known pathogens can be targeted for degradation through xenophagy, including Salmonella typhimurium, Streptococcus pyogenes, and Mycobacterium tuberculosis, and loss of core autophagy genes can result in enhanced vulnerability to these infections. Pathogens are generally targeted to LC3B or other Atg8 family members localized on autophagosome membranes. Sequestosome 1/p62-like receptors (SLRs) function as cargo receptors through ubiquitin-mediated interactions along with LIR-domain interactions with Atg8 proteins on the autophagosome. The SLR TAX1BP1 is recruited to ubiquitylated Salmonella and plays a key role in xenophagy (4). Another SLR NDP52 has also been reported to be required for xenophagy of several pathogens (5,6). LRSAM1 is an E3 ubiquitin ligase with a leucine-rich repeat recognized by microbial ligands and recruits NDP52 (7). In addition, galectins are a family of cytosolic lectins that are associated with phagophores and bacteria. Galectin-3 is recruited to bacterial membranes and is important for protection against Mycobacterium tuberculosis (8). TBK1 is a serine/threonine kinase that plays a major role in controlling autophagy by targeting substrates in the SLR family and the maturation of autophagosomes. TBK1 is phosphorylated at Ser172 within its activation loop, which is required for its kinase activity (9). Atg16L1 is a component of the Atg12-Atg5 conjugation system required for autophagosome maturation (10,11). ULK1-mediated phosphorylation of Atg16L1 at Ser278 promotes xenophagy (12).

  1. Reggio, A. et al. (2020) Exp Cell Res 396, 112276.
  2. Levine, B. (2005) Cell 120, 159-62.
  3. Deretic, V. et al. (2013) Nat Rev Immunol 13, 722-37.
  4. Tumbarello, D.A. et al. (2015) PLoS Pathog 11, e1005174.
  5. Verlhac, P. et al. (2015) Cell Host Microbe 17, 515-25.
  6. Fan, S. et al. (2020) Int J Mol Sci 21, 2008. doi: 10.3390/ijms21062008.
  7. Huett, A. et al. (2012) Cell Host Microbe 12, 778-90.
  8. Kumar, S. et al. (2017) Autophagy 13, 1086-1087.
  9. Kishore, N. et al. (2002) J Biol Chem 277, 13840-7.
  10. Fujita, N. et al. (2008) Mol Biol Cell 19, 2092-100.
  11. Mizushima, N. et al. (2003) J Cell Sci 116, 1679-88.
  12. Alsaadi, R.M. et al. (2019) EMBO Rep 20, e46885.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #56175

    Xenophagy Antibody Sampler Kit

    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-Atg16L1 (Ser278) (E7K6H) Rabbit mAb(上图)、Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb #8089(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对未经处理 (-) 或经 Torin 1 #14379 处理(250 nM,2 小时;+)的 C2C12 细胞和 H-4-II-E 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Atg16L1 (Ser278) (E7K6H) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对空载转染 (-) 或经表达 Myc/DDK 标记的全长人 Atg16L1 蛋白(hAtg16L1-Myc/DDK;+)和/或小鼠 ULK1 蛋白(mULK1;+)的构建体转染的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    对 Jurkat 细胞提取物的 Atg16L1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 进行沉淀,泳道 3 为 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb #8089。使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 LRSAM1 (D1O5S) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对野生型 (+/+) 或 TBK1/NAK 敲除型 (-/-) HCT 116 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb #43566(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或已经过 Chloroquine #14774 (50 μM,18 小时)处理的 HCT 116 和 HCT 116 LC3B 敲除型细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。HCT 116 敲除型细胞中没有信号,这证实了抗体对 LC3B 的特异性。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-Atg16L1 (Ser278) (E7K6H) Rabbit mAb(上图)、Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb #8089(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对未经处理 (-) 或经 Torin 1 #14379 处理(250 nM,2 小时;+)和/或经 ULK1 抑制剂 SBI-0206965 #29089 处理(50 μM,2 小时;+)的 AsPC-1 细胞、Calu-1 细胞和 HCT 116 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 TAX1BP1 (D1D5) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb(上图)或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504(下图)对用 TPA #4174(80 nM,过夜)分化后用 LPS (1 μg/ml) 处理长达 24 小时的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 NDP52 (D1E4A) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    对使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb(左图,红色)标记的固定冷冻的小鼠结肠进行共聚焦免疫荧光分析。先使用 COL1A1 (E8F4L) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #72827(右图,伪彩青色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)进行共同标记,然后使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 封闭游离的二抗结合位点。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    对使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb(左图,红色)标记的阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的固定冷冻的小鼠皮质下皮层进行共聚焦免疫荧光分析。先使用 Iba1/AIF-1 (E4O4W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #20825(右图,绿色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)进行共同标记,然后使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 封闭游离的二抗结合位点。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb(绿色)、DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)和 DAPI #4083(蓝色)对 SK-MEL-5 细胞(左图,阳性)和 SK-N-MC 细胞(右图,阴性)进行共聚焦免疫荧光分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    对来自 C2C12 细胞提取物的 Galectin-3/LGALS3 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb。使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胸腺进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 LRSAM1 (D1O5S) Rabbit mAb 对转染空载的 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签的全长人 LRSAM1蛋白 (hLRSAM1-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经 (-) 或已经 Chloroquine #14774(50 μM,18 小时;+)处理的 HeLa、C2C12 和 KNRK 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 TAX1BP1 (D1D5) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签、编码全长人 TAX1BP1 (hTAX1BP1-Myc/DDK, +) 同工型 1 的 cDNA 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb(上图)或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504(下图)对用 TPA #4174(80 nM,过夜)分化后用 LPS(1 μg/ml,1 小时)处理、未经处理或已经磷酸酶处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或带有 myc 标签的人 Atg16L1β (hAtg16L1β-Myc; +) 表达载体或小鼠 Atg16L1α  (mAtg16L1α; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。该 myc 标记的人 Atg16L1β 表达载体由University of California Berkeley Qing Zhong 博士友情提供。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的野生型小鼠大脑(左图)或来自阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的大脑(右图)进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    对 Raji 细胞提取物 TBK1/NAK 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb。使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb 对 WT(左图)或 TBK1 KO(右图)的 U20S 提取物进行蛋白质印迹法分析。用 Ponceau S 染色的膜进行总蛋白标准化(下图)。这些数据由 YCharOS Inc. 提供,该公司是一家开放科学公司,作为 CST 科学家生成的验证数据的合作伙伴,其使命是表征市售抗体。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对对照 HeLa 细胞(泳道 1)或 LC3B 敲除 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。LC3B 敲除 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 LC3B 的特异性。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb(绿色)对用 TPA #4174(80nM,过夜)(左图)处理后用 LPS(1μg/ml,1 小时)(中图)处理或用 LPS 和 λ 磷酸酶处理(右图)的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DY-554 Phalloidin(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb(绿色)对 EBSS 饥饿的 PANC-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 小鼠脾脏进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb(绿色)对野生型(左图,阳性)或 TBK1/NAK 敲除型(右图,阴性)HCT 116 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已带有 Alexa Fluor® 555 Phalloidin #8953(红色)标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb #43566(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对 KARPAS 299 和 VCap 细胞进行蛋白质印迹分析。根据 RNAseq 数据预测 VCap 细胞中 LC3B 的低信号,并确认抗体对 LC3B 的特异性。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对用 TPA(80 nM,4 天)#9905 分化、未经处理(蓝色)或已经过 LPS(1 ug/ml,1 小时;绿色)#14011 处理的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠睾丸进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠前胃进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 TALL-1 细胞(蓝色,阴性)和 Raji 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肾脏进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肝脏进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肺脏进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 41 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠卵巢进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 42 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 A20 同源肿瘤进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 43 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 GL261 同源肿瘤进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 44 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Renca 同源肿瘤进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 45 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(右图)作为对照,使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb(左图)对石蜡包埋的小鼠小肠进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 46 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (E7B6R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Raw 264.7 细胞沉淀物(左图,阳性)或 Neuro-2a 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 47 Expand Image
    使用 LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb(绿色)对未经处理(左图)或经过 Chloroquine #14774(50 µM,过夜)(中图)处理的 HCT 116 细胞或经过 Chloroquine #14774(50 µM,过夜)(右图)处理的 LC3B HCT 116 敲除型细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb(红色)标记,胞核用 DAPI #4083(蓝色)标记。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 48 Expand Image
    使用 LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb(绿色)和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色)对未经处理(左图)、用 EBSS 营养饥饿(2 小时;中间)或用 Chloroquine #14774 处理(50 μM,24 小时;右图)的 MIA PaCa-2 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
    Xenophagy Antibody Sampler Kit: Image 49 Expand Image
    使用 LC3B (E7X4S) XP® Rabbit mAb(绿色)和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色)对未经处理(左图)、用 EBSS 营养饥饿(2 小时;中间)或用 Chloroquine #14774 处理(50 μM,24 小时;右图)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。