Revision 2

#12656Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-SMAD1 (Ser463/465)/ SMAD5 (Ser463/465)/ SMAD9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb 13820 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
Phospho-SMAD1/5 (Ser463/465) (41D10) Rabbit mAb 9516 20 µl 60 kDa Rabbit 
Phospho-SMAD1 (Ser206) (D40B7) Rabbit mAb 5753 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
SMAD1 (D59D7) XP® Rabbit mAb 6944 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 38454 20 µl 70 kDa Rabbit IgG
SMAD5 (D4G2) Rabbit mAb 12534 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The SMAD1/5/9 Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting target proteins of the BMP signaling pathway. The kit includes enough antibody to perform two western blots with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Transforming growth factor-β (TGF-β) superfamily signaling plays a critical role in the regulation of cell growth, differentiation, and development in a wide range of biological systems. In general, signaling is initiated with ligand-induced oligomerization of serine/ threonine receptor kinases and phosphorylation of the cytoplasmic signaling molecules Smad2 and Smad3 for the TGF-β/activin pathway, or Smad1/5/9 for the bone morphogenetic protein (BMP) pathway. Carboxy-terminal phosphorylation of Smads by activated receptors results in their partnering with the common signaling transducer Smad4, and translocation to the nucleus. Activated Smads regulate diverse biological effects by partnering with transcription factors resulting in cell-state specific modulation of transcription (1-7) .

  1. Horbelt, D. et al. (2012) Int J Biochem Cell Biol 44, 469-74.
  2. Ikushima, H. and Miyazono, K. (2010) Nat Rev Cancer 10, 415-24.
  3. Kitisin, K. et al. (2007) Sci STKE 2007, cm1.
  4. Schmierer, B. and Hill, C.S. (2007) Nat Rev Mol Cell Biol 8, 970-82.
  5. Whitman, M. (1998) Genes Dev 12, 2445-62.
  6. Sapkota, G. et al. (2007) Mol Cell 25, 441-54.
  7. Alarcón, C. et al. (2009) Cell 139, 757-69.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意，否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件，除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受， 否书均被拒书，并且无效。

    专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明， 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的， 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专，且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的， 或专专售（专独或作专专成）或其他商专目的而专专专品，均需要 CST 的专独专可。客专：(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品，或使用专品制造任何商专专品，(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专，或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专， (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专，(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品， (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

    Orders: 877-616-CELL (2355)•[email protected]• Support: 877-678-TECH (8324)•[email protected]• Web: cellsignal.com
    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 2
    #12656

    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit

    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经过 BMP（50 ng/mL，1 小时）处理的 MCF7 细胞中的交联染色质和 Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human SMAD6 promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (1 mg/mL) from serum-starved 3T3 cells treated with hBMP2 (50ng/mL, 30 min) using Phospho-SMAD1/5 (Ser463/465) (41D10) Rabbit mAb. The virtual lane view (left) shows the target band (as indicated) and a band corresponding to Phospho-SMAD1/5 (Ser463/465) (as indicated) at 1:10 and 1:50 dilutions of primary antibody. 对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 SMAD5 (D4G2) Rabbit mAb 对来自各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD1 (Ser463/465)/ SMAD5 (Ser463/465)/ SMAD9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb（上图）和 SMAD1 (D59D7) XP® Rabbit mAb #6944（下图），对未经处理 (-) 或经 Human BMP2 #4697（50 ng/ml，30 分钟；+）处理的 Hep G2 细胞或 MEF 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对来自各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。HT-29 和 COLO 205 是确认抗体特异性的 SMAD4 无效型突变细胞系。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-Smad1 (Ser206) (D40B7) Rabbit mAb（上图）和 SMAD1 Antibody #9743（下图），对未经处理或经紫外线处理（60 mJ/cm2持续 2分钟，随后恢复 1.5 小时）的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 SMAD1 (D59D7) XP® Rabbit mAb 对来自各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD1/5 (Ser463/465) (41D10) Rabbit mAb 对未经处理或经 BMP-4 处理的 HeLa 细胞或 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Normal Rabbit IgG #2729（泳道 2）或 SMAD5 (D4G2) Rabbit mAb（泳道 3）对 HT-1080 细胞提取物的 SMAD5 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 SMAD5 (D4G2) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD1 (Ser463/465)/ SMAD5 (Ser463/465)/ SMAD9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb（绿色）和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #8584（红色），对经血清饥饿（过夜；左图）或经血清饥饿且经 Human BMP2 #4697（50 ng/ml，30 分钟，右图）处理的 HT-1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    对 HCT 116 细胞提取物的 SMAD4 蛋白进行免疫。泳道 1 为10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb。使用 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD1 (Ser206) (D40B7) Rabbit mAb（上图）和 SMAD1 Antibody #9743（下图），对未经处理或经 TPA #4174（200 nM，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD1/5 (Ser463/465) (41D10) Rabbit mAb（绿色）和 Cox IV (4D11-B3-E8) Mouse mAb #11967（红色），对经血清饥饿（左图）或经血清饥饿后经 hBMP2（50 ng/ml，30 分钟；右图）处理的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 Human BMP2 #4697（50 ng/ml，1 小时）处理的 MCF7 细胞中的交联染色质和 SMAD5 (D4G2) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human SMAD6 promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD1 (Ser463/465)/ SMAD5 (Ser463/465)/ SMAD9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb，对未经处理（蓝色）或经 Human BMP2 #4697（绿色）处理的 HT-1080 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经过 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。该图显示了在 SMAD4 的已知靶标基因 ID1 内的结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD1/5 (Ser463/Ser465) (41D10) Rabbit mAb（绿色）对经 BMP（左图）处理或未经处理（右图）处理的 HT-1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经过 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。该图显示了在染色体 20（上图）内的结合，包括 SMAD4 的已知靶基因 ID1（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 Human BMP2 #4697（50 ng/ml，1 小时）处理的 MCF7 细胞中的交联染色质和 SMAD1 (D59D7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human SMAD6 promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    Flow cytometric analysis of HT-1080 cells, untreated (blue) or treated with Human BMP-2 #4697 (50 ng/ml, 30 min; green) using Phospho-SMAD1/5 (Ser463/465) (41D10) Rabbit mAb (solid lines) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    SMAD 1/5/9 Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human JunB promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量使用与染色质输入总量（相当于1）相对应的信号表示。
    图像库
    更多了解我们如何获得图像
    Orders: 877-616-CELL (2355)•[email protected]• Support: 877-678-TECH (8324)•[email protected]• Web: cellsignal.com
    仅供研究使用。不得用于诊断流程。