Revision 1

#76696Store at -20C

1 个试剂盒

(7 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
DNA-PKcs (E6U3A) Rabbit mAb 38168 20 µl 450 kDa Rabbit IgG
Phospho-DNA-PKcs (Ser2056) (E9J4G) Rabbit mAb 68716 20 µl 450 kDa Rabbit IgG
Ku70 (D10A7) Rabbit mAb 4588 20 µl 70 kDa Rabbit IgG
Ku80 (C48E7) Rabbit mAb 2180 20 µl 86 kDa Rabbit IgG
DNA Ligase IV (D5N5N) Rabbit mAb 14649 20 µl 100 kDa Rabbit IgG
XLF Antibody 2854 20 µl 39 kDa Rabbit 
Artemis (D7O8V) Rabbit mAb 13381 20 µl 90 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting proteins involved in NHEJ DNA repair. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

DNA double-strand breaks (DSBs) are potentially hazardous lesions that can be induced by ionizing radiation (IR), radiomimetic chemicals, or DNA replication inhibitors. Cells recognize and repair DSBs via two distinct but partly overlapping signaling pathways, non-homologous end joining (NHEJ) and homologous recombination (HR). DNA repair via the HR pathway is restricted to S and G2 phases of the cell cycle, while NHEJ can occur during any phase. NHEJ machinery is also utilized in V(D)J recombination, a process that generates diversity in immunoglobulin and T cell receptor genes. Defects in both pathways have been associated with human disease, including cancer (1).
DNA repair through the NHEJ pathway involves a core group of proteins that includes the Ku heterodimer (Ku70/Ku80), DNA-PKcs, DNA ligase IV, XRCC4, and XLF. XLF interacts with XRCC4 and promotes the ligation of DNA strands by DNA ligase IV and the ligase cofactor XRCC4. The ATP-dependent ligation of free DNA ends is the final step in the NHEJ repair pathway (2). DNA ligase IV and the endonuclease artemis suppress homologous recombination and promote NHEJ (3).

  1. Hartlerode, A.J. and Scully, R. (2009) Biochem J 423, 157-68.
  2. Tsai, C.J. et al. (2007) Proc Natl Acad Sci U S A 104, 7851-6.
  3. Kurosawa, A. et al. (2013) PLoS One 8, e72253.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    Revision 1
    #76696

    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit

    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Artemis (D7O8V) Rabbit mAb,对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 DNA Ligase IV (D5N5N) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb 对 HeLa 、A549 和 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 XLF Antibody 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体(上图)或 α-辅肌动蛋白 (D6F6) XP® 兔单克隆抗体 #6487(下图)对 DNA-PKcs 表达水平正常的 M059K 细胞以及缺乏 DNA-PKcs 的 M059J 细胞提取物进行蛋白印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Ku70 (D10A7) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-DNA-PKcs (Ser2056) (E9J4G) 兔单克隆抗体(上图)、全 DNA-PKcs (E6U3A) Rabbit mAb #38168(中间)或 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对未经 (-) 或已经新制癌菌素(0.5 µg/ml,1 小时;+)处理以诱导 DNA 双链断裂的 M059K(DNA-PKcs 阳性)和 M059J(DNA-PKcs 阴性)细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道 2)或 Artemis (D7O8V) Rabbit mAb (泳道 3),对 HT-29 细胞提取物中的 Artemis 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Artemis (D7O8V) Rabbit mAb,进行蛋白质印迹分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人胶质母细胞瘤进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体对石蜡包埋的人乳腺导管癌进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体对石蜡包埋的正常人结肠进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人黑色素瘤进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体对石蜡包埋的人肾细胞癌进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人 GIST 进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体对石蜡包埋的人肺鳞状细胞癌进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体对石蜡包埋的人子宫内膜癌进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb(绿色)对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体对石蜡包埋的 M059K 细胞沉淀物(左图,阳性)或 M059J 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    对 HeLa 细胞的 Ku80 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 进行沉淀,泳道 3 为 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb #2180。使用 Ku80 (C48E7) Rabbit mAb #2180 进行蛋白质印迹法分析。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体(绿色)对 M059K 细胞(左图,阳性)和 M059J 细胞(右图,阴性)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。
    Non-Homologous End Joining (NHEJ) DNA Repair Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 DNA-PKcs (E6U3A) 兔单克隆抗体(实线)或浓度匹配的兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900(虚线)对 M059J 细胞(蓝色)和 M059K 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。