Revision 1

#49938Store at -20C

1 个试剂盒

(7 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 3892 20 µl 80 kDa Rabbit IgG
ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 67824 20 µl 22 kDa Rabbit IgG
Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb 9129 20 µl Rabbit IgG
MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 3619 20 µl 125 kDa Rabbit IgG
Survivin (71G4B7) Rabbit mAb 2808 20 µl 16 kDa Rabbit IgG
HP1α/β (C7F11) Rabbit mAb 2623 20 µl 25 kDa Rabbit IgG
Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb 2914 20 µl 35, 40, 48 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

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Description

The Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting proteins identified as markers of microglial proliferation by western blot and/or immunofluorescence.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Distinct microglial activation states have been identified using RNA-seq data from a vast array of neurological disease and aging models. These activation states have been categorized into modules corresponding to proliferation, neurodegeneration, interferon-relation, LPS-relation, and many others (1). Previous work identifying markers of specific brain cell types using RNA-seq has shown HS1 and ASC/TMS1 to be useful and specific tools to study microglia (2). HS1 is a protein kinase substrate that is expressed only in tissues and cells of hematopoietic origin (3) and ASC/TMS1 has been found to be a critical component of inflammatory signaling where it associates with and activates caspase-1 in response to pro-inflammatory signals (4).
Ki-67 is a nuclear nonhistone protein (5) universally expressed among proliferating cells and absent in quiescent cells (6). Minichromosome maintenance protein 2 (MCM2) is a nuclear protein that plays a role in DNA replication and cell division (7) and is commonly used as a marker for cell proliferation, including brain tissue (8). Survivin binds and inhibits caspase-3, controlling the checkpoint in the G2/M-phase of the cell cycle by inhibiting apoptosis and promoting cell division (9). Aurora A, B, and C are a family of highly conserved serine/threonine kinases that regulate chromosomal alignment and segregation during mitosis and meiosis. Their activity requires autophosphorylation of a threonine within their kinase domain at site Thr288 of Aurora A, Thr232 of Aurora B, and Thr198 of Aurora C (10). Heterochromatin protein 1 (HP1) α and β are heterochromatic adaptor molecules involved in both gene silencing and higher order chromatin structure (11).

  1. Friedman, B.A. et al. (2018) Cell Rep 22, 832-47.
  2. Zhang, Y. et al. (2014) J Neurosci 34, 11929-47.
  3. Kitamura, D. et al. (1995) Biochem Biophys Res Commun 208, 1137-46.
  4. Srinivasula, S.M. et al. (2002) J Biol Chem 277, 21119-22.
  5. Gerdes, J. et al. (1983) Int J Cancer 31, 13-20.
  6. Weigel, M.T. and Dowsett, M. (2010) Endocr Relat Cancer 17, R245-62.
  7. Mincheva, A. et al. (1994) Cytogenet Cell Genet 65, 276-7.
  8. Doorn, K.J. et al. (2014) Neural Plast 2014, 959154.
  9. Li, F. et al. (1999) Nat Cell Biol 1, 461-6.
  10. Goldenson, B. and Crispino, J.D. (2015) Oncogene 34, 537-45.
  11. Maison, C. and Almouzni, G. (2004) Nat Rev Mol Cell Biol 5, 296-304.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #49938

    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit

    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7) Rabbit mAb #2808 对 Jurkat 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 HP1 α (C7F11) Rabbit mAb，对来自 HeLa 细胞、NIH/3T3 细胞、C6 细胞和 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对 Raji（人）、BaF3（小鼠）和 C6（大鼠）细胞系裂解物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D11A13) XP® Rabbit mAb （上）或 Aurora B/AIM1 Antibody #3094（下），对 HeLa、L929 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析，三种细胞用 4 mM 的羟基脲处理 20 小时以诱导 G1/S 期，或用 100 nM paclitaxel 或100 ng/ml nocodazole 处理 20 小时以诱导 G2/M 期。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 对 Baf3、32D 和小鼠脾脏的细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对来自 J774A.1 细胞和 Raw 264.7 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb（绿色）对 P21 小鼠脑的脑室区细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight™ 554 phalloidin #13054（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 HP1 α (C7F11) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析，并显示核定位。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb #2808 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125，对使用 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® Survivin siRNA II (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 确认存活素表达的沉默，α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 用于存活素 siRNA 上样和特异性控制。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb（绿色）、 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #2116（红色）和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706（蓝色），对 HT-1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对 HeLa 细胞裂解物中的 MCM2 进行免疫沉淀，接着用相同的抗体对其进行蛋白质印迹分析。泳道 1 是 5% 输入对照。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脾脏进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    对 J774A.1 细胞提取物 ASC/TMS1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 ASC (D2W8U) Rabbit mAb。使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    在对照肽（左）或 HP1 α 封闭肽 #1004（右）存在的情况下，使用 HP1 α (C7F11) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人膀胱移行上皮癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用与碘化丙啶（DNA 含量）相对比的 Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb，对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。框内细胞群表明 phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) 阳性细胞。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 LL2 同源肿瘤进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 J774A.1 细胞沉淀物（左图，阳性）或 RAW 264.7 细胞沉淀物（右图，阴性）进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb 和 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 HP1α (C7F11) Rabbit mAb（绿色），对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb #2808 对石蜡包埋的人肺癌（显示胞核定位）进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse cortex from wild-type (left) or an amyloid mouse model of Alzheimer's disease (right) using HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (green). After blocking free secondary antibody binding sites with Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, the tissue was then labeled using β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #35363 (red) and ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (blue).
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠前胃组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    在对照肽（左）或 Survivin Blocking Peptide #1037（右）存在的情况下，使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类小肠进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。首先用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb（绿色）和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450（黄色）标记切片。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后，切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657（红色）孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082（蓝色）标记。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脑组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人垂体腺瘤进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb（绿色）对 32D 细胞（左图）和 C2C12 细胞（右图）进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）比较，使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb（左图）对石蜡包埋的小鼠结肠组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 HT-1080 细胞（经 50 ng/ml 的 IFN-γ 处理 30 分钟）中提取的交联染色质，在加入 MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后， 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers #5148、 人类 IRF-1 启动子引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 的方法对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    Flow cytometric analysis of NIH/3T3 cells (blue, negative) and 32D clone 3 cells (green, positive) using HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (solid lines) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胸腺组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。已用 MitoTracker® Red CMXRos（红色）标记线粒体。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 41 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠小肠组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 42 Expand Image
    使用 Survivin (71G4B7E) Rabbit mAb（蓝色），且对照非特异性阴性对照抗体（红色），对未处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 43 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Renca 同基因肿瘤（左上图）、4T1 同基因乳腺肿瘤（右上图）、Renca 细胞沉淀物（左下图）和 4T1 细胞沉淀物（右下图）进行免疫组织化学分析。两种肿瘤均显示浸润的免疫细胞染色。请注意，Renca 肿瘤细胞中存在染色，而 4T1 肿瘤细胞中没有染色，这与相应细胞沉淀的染色结果一致。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 44 Expand Image
    对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。切片首先经 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb #67824（绿色）和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450（黄色）标记。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后，切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657（红色）孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082（蓝色）标记。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 45 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb（绿色）对未经处理（左上图）或经 LPS（50 ng/ml，4 小时，中图）处理或经 LPS 处理、接着经 ATP（5 mM，45 分钟，右上图）处理的小鼠原代骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 和 J774A.1 细胞（左下图）或 Raw 细胞 264.7（右下图）进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。注意，经过LPS 和 ATP（白色箭头）刺激后，ASC 会转位至炎症小体。
    Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit: Image 46 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对 Raw264.7 细胞（蓝色）和 J774A.1 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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