Revision 1

#93195Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 67824 20 µl 22 kDa Rabbit IgG
HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 3892 20 µl 80 kDa Rabbit IgG
Cathepsin B (D1C7Y) XP® Rabbit mAb 31718 20 µl 44, 27, 24 kDa Rabbit IgG
HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb 36169 20 µl 120 kDa Rabbit IgG
Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb 3434 20 µl 120 kDa Rabbit IgG
Galectin-3/LGALS3 (D4I2R) XP® Rabbit mAb 87985 20 µl 28 kDa Rabbit IgG
Axl (C89E7) Rabbit mAb 8661 20 µl 138 kDa Rabbit IgG
CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb 76437 20 µl Rabbit IgG
CD68 MultiMab® Rabbit mAb mix 86985 20 µl 70-80, 130-140 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting proteins identified as markers of microglial activity during neurodegeneration by western blot and/or immunofluorescence.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Distinct microglial activation states have been identified using RNA-seq data from a vast array of neurological disease and aging models. These activation states have been categorized into modules corresponding to proliferation, neurodegeneration, interferon-relation, LPS-relation, and many others (1). Previous work identifying markers of specific brain cell types using RNA-seq has shown HS1 and ASC/TMS1 to be useful and specific tools to study microglia (2). HS1 is a protein kinase substrate that is expressed only in tissues and cells of hematopoietic origin (3) and ASC/TMS1 has been found to be a critical component of inflammatory signaling where it associates with and activates caspase-1 in response to pro-inflammatory signals (4).
CD68 is a common marker for macrophage lineage cells; with expression found in the lysosome making it a useful marker for activated phagocytic microglia (5). Galectin-3 has been shown to regulate inflammatory response in neurodegenerative diseases, released by microglia in response to inflammatory stimuli (6). Cathepsin B is a widely expressed cysteine peptidase located in the lysosome as well as processed and secreted, playing a role in microglial-mediated neuronal death (7). Hypoxia inducible factor-1 (HIF-1α) is a transcription factor responsible for adaptation to low oxygen environments whose downstream effects have been shown in a number of neurodegenerative diseases. Under normoxic conditions, HIF-1α is proline hydroxylated leading to ubiquitin mediated degradation (8). Axl is a receptor tyrosine kinase that binds Gas6, stimulating regulatory effects on microglial phagocytic response to inflammatory stimuli (9).

  1. Friedman, B.A. et al. (2018) Cell Rep 22, 832-47.
  2. Zhang, Y. et al. (2014) J Neurosci 34, 11929-47.
  3. Kitamura, D. et al. (1995) Biochem Biophys Res Commun 208, 1137-46.
  4. Srinivasula, S.M. et al. (2002) J Biol Chem 277, 21119-22.
  5. Hopperton, K.E. et al. (2018) Mol Psychiatry 23, 177-98.
  6. Yip, P.K. et al. (2017) Sci Rep 7, 41689.
  7. Gan, L. et al. (2004) J Biol Chem 279, 5565-72.
  8. Zhang, Z. et al. (2011) Curr Med Chem 18, 4335-43.
  9. Grommes, C. et al. (2008) J Neuroimmune Pharmacol 3, 130-40.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    MultiMab is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    Revision 1
    #93195

    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit

    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常食蟹猴脾脏进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb #8661 对 HeLa 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Cathepsin B (D1C7Y) XP® Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb(上图)或总 HIF-1α Antibody #3716(下图),对用 10 μM 的 MG132(累积羟基化 HIF-1α )或 10 µM MG132 和 1 mM DMOG(累积非羟基化 HIF-1α)处理的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经 (-) 或已经氯化钴(100 µM,4 小时;+)处理的 Hep G2 细胞、未经 (-) 或已经氯化钴(100 µM,4 小时;+)处理的 Raji 细胞或未经 (-) 或已经 DMOG(1 mM,6 小时;+)处理的 U-2 OS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 对 Baf3、32D 和小鼠脾脏的细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对来自 J774A.1 细胞和 Raw 264.7 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb #8661(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或 Axl 敲除型 (+) HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    Western blot analysis of extracts from THP-1, U-937, and Jurkat cells using CD68 MultiMab® Rabbit mAb mix (upper) or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (D4I2R) XP® Rabbit mAb 对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Cathepsin B (D1C7Y) XP® Rabbit mAb 对转染空載 (-) 或由构建表达全长人组织蛋白酶B (hCTSB; +) 或小鼠组织蛋白酶B (mCTSB; +) 转染的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb(绿色),对用 10 μM MG132(左)或 10 μM MG132 和 1 mM DMOG(右)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝已用 DY-554 phalloidin(红色)标记。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    对经氯化钴(100 µM,4 小时)处理的 Hep G2 细胞裂解物的 HIF-1α 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10 % input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 is HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb。使用 HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脾脏进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    对 J774A.1 细胞提取物 ASC/TMS1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 ASC (D2W8U) Rabbit mAb。使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫浆液性乳头状癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    从 U-937 细胞提取物免疫沉淀 CD68。Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is CD68 MultiMab® Rabbit mAb mix. Western blot analysis was performed using CD68 MultiMab® Rabbit mAb mix.
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    从 SK-MEL-28 细胞提取物免疫沉淀半乳糖凝集素-3/LGALS3。泳道 1 是 10 % input,泳道 2 是 Normal Rabbit IgG #2729,并且泳道 3 是 Galectin-3/LGALS3 (D4I2R) XP® Rabbit mAb(泳道 3)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Cathepsin B (D1C7Y) XP(R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb(绿色)对未经(左图)或经氯化钴(500 μM,24 小时;右图)处理的 HepG2 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 LL2 同源肿瘤进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 J774A.1 细胞沉淀物(左图,阳性)或 RAW 264.7 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。注意浸润细胞的染色。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (D4I2R) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Cathepsin B (D1C7Y) XP(R) Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人肾脏进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype control #3900(虚线),对未经处理(蓝色)或已经 DMOG (1 mM,6 小时;绿色)处理的 U-2 OS 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse cortex from wild-type (left) or an amyloid mouse model of Alzheimer's disease (right) using HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (green). After blocking free secondary antibody binding sites with Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, the tissue was then labeled using β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #35363 (red) and ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (blue).
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠前胃组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肾细胞癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (D4I2R) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 SK-MEL-28 细胞沉淀物(左)和 LNCaP 细胞沉淀物(右)进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 Cathepsin B (D1C7Y) XP(R) Rabbit mAb对石蜡包埋的人卵巢癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对经氯化钴 (100 μM) 过夜处理的MCF7 细胞中提取的交联染色质,在加入HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb后,进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。本图显示在 ARRDC3(HIF-1α 的一个已知靶基因)内的结合作用(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他图)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。首先用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb(绿色)和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450(黄色)标记切片。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后,切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657(红色)孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082(蓝色)标记。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脑组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® rabbit mAb(红色)、PD-1 (EH33) mouse mAb #43248(绿色)、CD8α (C8/144B) mouse mAb #70306(品红色)、Pan-keratin (C11) mouse mAb #4545(青色)、LAG3 (D2G4O) XP® rabbit mAb #15372(橙色)和 TIM-3 (D5D5R) XP® rabbit mAb #45208(黄色)对石蜡包埋的人肺腺癌进行多重免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人 B 细胞非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 41 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在下,使用 Galectin-3/LGALS3 (D4I2R) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 42 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对经氯化钴 (100 μM) 过夜处理的MCF7 细胞中提取的交联染色质,在加入HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb后,进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 5(上图)内的结合,包括 HIF-1α 的已知靶标基因 ARRDC3(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 43 Expand Image
    使用 HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb(绿色)对 32D 细胞(左图)和 C2C12 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 44 Expand Image
    与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(右图)比较,使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb(左图)对石蜡包埋的小鼠结肠组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 45 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® rabbit mAb(橙色)、PD-L1 (E1L3N®) XP® rabbit mAb #13684(红色)、PD-L2 (D7U8C™) XP® 兔单克隆抗体 #(品红色)、PD-L2 (D7U8C) XP® rabbit mAb (magenta) #82723, Arginase-1 (D4E3M) XP® rabbit mAb #93668(绿色)、IDO (D5J4E) rabbit mAb #86630(黄色)和 Pan-keratin (C11) mouse mAb #4545(青色)对石蜡包埋的人卵巢癌进行多重免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 46 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 47 Expand Image
    使用 Galectin-3/LGALS3 (D4I2R) XP® Rabbit mAb(绿色)对 SK-MEL-28 细胞(左)和 LNCaP 细胞(右)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 48 Expand Image
    使用 Cathepsin (D1C7Y) XP® Rabbit mAb(绿色)和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色)对 Malme-3M(左图)和 MCF7(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。 蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 49 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对经氯化钴(100 μM) 过夜处理的 MCF7 细胞中提取交联染色质,在加入 HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 human ARRDC3 downstream primers, SimpleChIP® Human ERRFI1 Upstream Primers #31180 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行量化。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 50 Expand Image
    Flow cytometric analysis of NIH/3T3 cells (blue, negative) and 32D clone 3 cells (green, positive) using HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (solid lines) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed lines). Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 51 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胸腺组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 52 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 THP-1 细胞沉淀物(左)和 Jurkat 细胞沉淀物(右)进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 53 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的转移性肺癌进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 54 Expand Image
    使用 Cathepsin B (D1C7Y) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对固定/通透的 Daudi 细胞(蓝色,阴性)和 SK-MEL-28 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 55 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #100,对经过氯化钴( μM)过夜处理的 MCF7 细胞和 HIF-1α (D1S7W) XP®86652 Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 STC2 内结合,STC2 是一种已知的 HIF-1α 靶标基因(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 56 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠小肠组织进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 57 Expand Image
    使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb(绿色)对 THP-1 细胞(左)和 Jurkat 细胞(右)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。显示来自 z-stack 系列的投射图像。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 58 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的细胞沉淀物 NCI-H1299(左)或 Jurkat(右)进行免疫组织化学分析。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 59 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #100,对经过氯化钴( μM)过夜处理的 MCF7 细胞和 HIF-1α (D1S7W) XP®86652 Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 5(上图)内的接合,包括 HIF-1α 的已知靶基因 STC2(下图)(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 60 Expand Image
    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Renca 同基因肿瘤(左上图)、4T1 同基因乳腺肿瘤(右上图)、Renca 细胞沉淀物(左下图)和 4T1 细胞沉淀物(右下图)进行免疫组织化学分析。两种肿瘤均显示浸润的免疫细胞染色。请注意,Renca 肿瘤细胞中存在染色,而 4T1 肿瘤细胞中没有染色,这与相应细胞沉淀的染色结果一致。
    Microglia Neurodegeneration Module Antibody Sampler Kit: Image 61 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 作为对照,使用 CD68 (D4B9C) XP® Rabbit mAb(右图)对用抗人 CD14 共染色的活性人外周血单核细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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    使用 CUT&RUN Assay Kit #66362,对经过氯化钴(100 μM)过夜处理的 MCF7 细胞和 HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #86652 进行 CUT&RUN 分析。使用human STC2 exon 1 primers、human FAM162A promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
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    以浓度匹配的兔 (DA1E) 单抗 IgG XP® 同型对照 #3900(左图)作为对照,使用 CD68 (D4B9C) XP® 兔单抗(右图)对用抗人 CD14 共染色的固定和透化人外周血单核细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb(绿色)对 DU 145(左)和 HCC827(右)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
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    使用 CD68 (D4B9C) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对固定和通透的 Jurkat 细胞(蓝色,阴性)和 THP-1 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
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    使用 Axl (C89E7H4) Rabbit mAb 对固定和透化的 Jurkat 细胞(蓝色,阴性)和 DU145 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞术分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
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    对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。切片首先经 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb #67824(绿色)和 APP/β-Amyloid (NAB228) Mouse mAb #2450(黄色)标记。用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 封闭游离二抗结合位点之后,切片用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #3657(红色)孵育。胞核用 Hoechst 33342 #4082(蓝色)标记。
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    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb(绿色)对未经处理(左上图)或经 LPS(50 ng/ml,4 小时,中图)处理或经 LPS 处理、接着经 ATP(5 mM,45 分钟,右上图)处理的小鼠原代骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 和 J774A.1 细胞(左下图)或 Raw 细胞 264.7(右下图)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。注意,经过LPS 和 ATP(白色箭头)刺激后,ASC 会转位至炎症小体。
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    使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 Raw264.7 细胞(蓝色)和 J774A.1 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。