Revision 2

#89985Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 2435 20 µl 53, 57 kDa Rabbit IgG
CtBP1 (D2D6) Rabbit mAb 8684 20 µl 47 kDa Rabbit IgG
p53 (7F5) Rabbit mAb 2527 20 µl 53 kDa Rabbit IgG
SUMO-1 (C9H1) Rabbit mAb 4940 20 µl Rabbit IgG
NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb 13586 20 µl 50 Active form. 120 Precursor kDa Rabbit IgG
ACF1 Antibody 6255 20 µl 203 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Huntingtin Interaction Antibody Sampler kit provides an economical means of detecting transcription-related proteins that interact with Huntingtin (Htt). This kit contains enough antibody to perform two western blot experiments per primary antibody.

Background

Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARG) is a member of the ligand-activated nuclear receptor superfamily and functions as a transcriptional activator (1). Besides its role in mediating adipogenesis and lipid metabolism (2), PPAR gamma also modulates insulin sensitivity, cell proliferation and inflammation (3). CtBP1 is able to regulate gene activity through its intrinsic dehydrogenase activity (4,5) and by interacting with Polycomb Group (PcG) proteins during development (6). Along with its homologue, CtBP2, it acts as a transcriptional corepressor of zinc-finger homeodomain factor deltaEF1 to regulate a wide range of cellular processes through transrepression mechanisms (7). The p53 tumor suppressor protein plays a major role in cellular response to DNA damage and other genomic aberrations. Activation of p53 can lead to either cell cycle arrest and DNA repair or apoptosis (8). DNA damage induces phosphorylation of p53 at Ser15 and Ser20 and leads to a reduced interaction between p53 and its negative regulator, the oncoprotein MDM2 (9). MDM2 inhibits p53 accumulation by targeting it for ubiquitination and proteasomal degradation (10,11). Phosphorylation impairs the ability of MDM2 to bind p53, promoting both the accumulation and activation of p53 in response to DNA damage (9,12). Acetylation appears to play a positive role in the accumulation of p53 protein in stress response (13). Deacetylation of p53 occurs through interaction with the SIRT1 protein, a deacetylase that may be involved in cellular aging and the DNA damage response (14). Small ubiquitin-related modifier 1, 2 and 3 (SUMO-1, -2 and -3) are members of the ubiquitin-like protein family (15). The covalent attachment of the SUMO-1, -2 or -3 (SUMOylation) to target proteins is analogous to ubiquitination. Ubiquitin and the individual SUMO family members are all targeted to different proteins with diverse biological functions. Ubiquitin predominantly regulates degradation of its target (1). In contrast, SUMO-1 is conjugated to RanGAP, PML, p53 and IkB-alpha to regulate nuclear trafficking, formation of subnuclear structures, regulation of transcriptional activity and protein stability (16-20). Transcription factors of the nuclear factor kappaB (NF-kB)/Rel family play a pivotal role in inflammatory and immune responses (21, 22). In unstimulated cells, NF-kB is sequestered in the cytoplasm by IkB inhibitory proteins (23-25). NF-kB-activating agents can induce the phosphorylation of IkB proteins, targeting them for rapid degradation through the ubiquitin-proteasome pathway and releasing NF-kB to enter the nucleus where it regulates gene expression (26-28). ACF1 (BAZ1A) has distinct roles in development (29), regulation of chromatin structure (30), and DNA damage response (31, 32). Different developmental stages dictate the expression of ACF1 in Drosophila, and alterations in ACF1 expression during Drosophila development leads to deviation from normal chromatin organization (29).

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Background References

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    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
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    Revision 2
    #89985

    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit

    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 对 NIH/3T3 和 3T3-L1 细胞(分化 6 天成为脂肪细胞)的提取物进行蛋白印迹分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 对未分化(左)或已分化(右)的 3T3-L1 细胞进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠褐色脂肪进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用在分化细胞中显示胞核定位的 PPARγ (C26H12A8) Rabbit mAb(红色)对 3T3-L1 进行共聚焦免疫荧光分析。用 BODIPY 493/503(绿色)标记脂肪滴。蓝色伪彩 = DRAQ5 (DNA 荧光染料)。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 p53 (7F5) Rabbit mAb #2527 对 COS-7 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb,对不同细胞系和大鼠脾的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经人 TNF-α #8902(30 ng/ml,1 小时)处理的 HeLa 细胞和 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。€‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了 NFkB 的已知靶标基因 NFKBIA 内的结合(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对未经处理的 HDLM-2 细胞的交联染色质与 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 文库。该图显示结合遍及 FOXN3(PPARγ 的已知靶标基因) 。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 p53 (7F5) Rabbit mAb 对 293 和 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 SUMO-1 (C9H1) Rabbit mAb 对重组 GST-SUMO-1 蛋白 (38 kDa) 与 Jurkat 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 ACF1 Antibody 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 CtBP1 (D2D6) Rabbit mAb 对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 NF-κB1 (D4P4D) Rabbit mAb(泳道 3),对 Raji 细胞提取物的 NF-κB1 p105/p50 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb #3677 作为二抗。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经人 TNF-α #8902(30 ng/ml,1 小时)处理的 HeLa 细胞和 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。€‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在染色体 14(上图)内的结合,包括 NFkB 的已知靶基因 NFKBIA(下图)(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对未经处理的 HDLM-2 细胞的交联染色质与 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 文库。该图显示结合遍及染色体 14(上图),包括 FOXN3( PPARγ 的已知靶标基因)(下图)。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 p53 (7F5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 SUMO-1 (C9H1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在下,使用 CtBP1 (D2D6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb(绿色),对 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。而 C2C12 细胞为未处理(左)或经 Mouse Tumor Necrosis Factor-α (mTNF-α) #5178(20 ng/ml,30 分钟;右)进行处理。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经人 TNF-α #8902(30 ng/ml,1 小时)处理的 HeLa 细胞和 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 检测。使用 SimpleChIP® Human IκBα Promoter Primers #5552 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 HDLM-2 细胞的交联染色质与 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human FOXN3 Intron 3 Primers #95568、human STON2 intron 4 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 p53 (7F5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 CtBP1 (D2D6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺鳞状细胞癌进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb(实线)对 NIH/3T3 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 p53 (7F5) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HT-29(左)和 SaOs-2(右)细胞进行免疫组织化学分析。注意 p53-阴性 SaOs-2 细胞中的染色不足情况。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 CtBP1 (D2D6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌进行免疫组织化学分析。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 p53 (7F5) Rabbit mAb(绿色) 对 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对经 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902 (30 ng/ml,1 小时)处理的 HeLa 细胞中提取的交联染色质,在加入 NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human IκBα Promoter Primers #5552、人 IL-8 启动子引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 p53 (7F5) Rabbit mAb(实线)对 HT-29 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 CtBP1 (D2D6) Rabbit mAb(绿色)对 293T 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。
    Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对经过 UV ((100 J/m2之后 3 小时恢复)处理的 HCT116 细胞中提取的交联染色质,在加入p53 (7F5) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729后进行染色质免疫沉淀。采用 SimpleChIP® Human CDKN1A Promoter Primers #6449、human MDM2 intron 2 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时定量 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。