Revision 1

#68355Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
MX1 (D3W7I) Rabbit mAb 37849 20 µl 76 kDa Rabbit IgG
OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb 14498 20 µl 40, 44 kDa Rabbit IgG
RNase L (D4B4J) Rabbit mAb 27281 20 µl 80 kDa Rabbit IgG
IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb 59212 20 µl 15 kDa Rabbit IgG
BST2 (D5V5Z) Rabbit mAb 19277 20 µl 28-40 kDa Rabbit IgG
TRIM5α (D6Z8L) Rabbit mAb 14326 20 µl 56 kDa Rabbit IgG
Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 3398 20 µl 38 kDa Rabbit IgG
Phospho-SAMHD1 (Thr592) (D7O2M) Rabbit mAb 89930 20 µl 72 kDa Rabbit IgG
IFITM1 Antibody 13126 20 µl 14 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting the expression of various host cell viral restriction factors using phospho-specific and total protein antibodies. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Viral restriction factors are proteins produced by host cells that function, in part, to negatively impact various stages of viral life cycles in order to prevent propagation. MX1 (Myxovirus resistance protein 1/MxA) is an interferon-inducible antiviral protein that confers resistance to RNA viruses by blocking transcription of the viral genome (1,2).

2’-5’-oligoadenylate synthetase 1 (OAS1) is an antiviral protein induced by type 1 interferon that plays a key role in the cellular innate immune response (3). The OAS1 enzyme produces a second messenger, 2’-5’-linked oligoadenylate, which binds to RNase L, which then degrades viral and cellular RNA (4). Research studies indicate that the OAS1 system inhibits protein synthesis and induces apoptosis in virally infected cells, which limits viral infection (5).

Interferon-induced transmembrane protein (IFITM) family members, IFITM1 and IFITM3, appear to function as viral restriction factors by preventing fusion of viral and host membranes (6,7).

BST2 (CD317, Tetherin, HM1.24) is a type II transmembrane glycoprotein functioning as a major mediator of the innate immune defense against the dissemination of enveloped viruses by tethering viron on the cell surface, preventing viral release (8).

TRIM5α blocks viral infection by interacting with the incoming viral capsid and promoting its premature disassembly (9).

PKR-induced phosphorylation of the eukaryotic initiation factor 2 (eIF2) α subunit at Ser51 is a well-documented mechanism to downregulate protein synthesis upon viral infection (10).

SAM domain and HD domain-containing protein 1 (SAMHD1) prevents autoimmunity and HIV infection by hydrolyzing intracellular deoxynucleoside triphosphates (dNTPs), thereby limiting inappropriate immune activation by self nucleic acid and inhibiting reverse transcription of the HIV genome (11). Phosphorylation of SAMHD1 at Thr592 by cyclin A2/CDK1 was identified as a regulatory mechanism that controls SAMHD1 activity. SAMHD1 is phosphorylated in proliferating cells, which inhibits its ability to block HIV infection (12).

  1. Staeheli, P. et al. (1986) Cell 44, 147-58.
  2. Kochs, G. and Haller, O. (1999) Proc Natl Acad Sci U S A 96, 2082-6.
  3. Schoggins, J.W. et al. (2011) Nature 472, 481-5.
  4. Dong, B. and Silverman, R.H. (1997) J Biol Chem 272, 22236-42.
  5. Castelli, J.C. et al. (1998) Cell Death Differ 5, 313-20.
  6. Brass, A.L. et al. (2009) Cell 139, 1243-54.
  7. Feeley, E.M. et al. (2011) PLoS Pathog 7, e1002337.
  8. Le Tortorec, A. et al. (2011) Viruses 3, 520-40.
  9. Stremlau, M. et al. (2006) Proc Natl Acad Sci U S A 103, 5514-9.
  10. Zamanian-Daryoush, M. et al. (2000) Mol Cell Biol 20, 1278-90.
  11. Powell, R.D. et al. (2011) J Biol Chem 286, 43596-600.
  12. Cribier, A. et al. (2013) Cell Rep 3, 1036-43.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    Revision 1
    #68355

    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit

    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image

    使用 OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb #14498 对 HT-29 + hIFN⍺ -1 (10ng/mL, O/N) + poly(I:C )(2.5µg/mL,7 小时)+ MG-132(10µM,7 小时)裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess Simple Western 仪器上进行该实验。

    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb #59212 对来自 HeLa 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 IFITM1 Antibody 对 K-562 细胞、CD4+ T 细胞和 CD8 + T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 TRIM5α (D6Z8L) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb (上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图),对未经处理 (-) 或已经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml,16 小时;+)处理的 HeLa、NCI-H460 和 HT-29 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 BST2 (D5V5Z) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 RNase L (D4B4J) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb (上)或 eIF2α Antibody #9722(下)对未经处理的或经 Thapsigargin 处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对未经 (-) 或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml, 16 hr; +) 处理的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-SAMHD1 (Thr592) (D7O2M)(上图)或 SAMHD1 Antibody #12361(下图),对未经处理 (-) 或已经牛小肠磷酸酶 (CIP) 和 λ 磷酸酶 (+) 处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 IFITM1 Antibody 对转染空载 (-) 或转染全长人 IFITM1 表达载体(hIFITM1; +) 的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 TRIM5α (D6Z8L) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签的全长人 TRIM5α (hTRIM5α-Myc/DDK) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染表达人 OAS1 同工型 p41 (hOAS1 p41; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 RNase L (D4B4J) Rabbit mAb 对未转染 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签的全长人 RNase L (hRNase L-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Phopsho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 对未经处理的(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    对使用 Human Interferon-α1 #8927 (10 ng/ml, 16 hr) 处理的 HeLAN 细胞提取物 MX1 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,而泳道 3 为 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb。使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb 执行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb,对未转染 (-) 或转染带有 Myc 标签的全长人 IFITM3 表达载体 (hIFITM3-Myc; +) 的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Phospho-SAMHD1 (Thr592) (D7O2M) Rabbit mAb(上图)、SAMHD1 Antibody #12361(中间)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理 (-) 或已经 TPA (12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯) #4174(80 nM,16 小时;+)处理的 Jurkat 和 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 IFITM1 Antibody(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对未经处理(-) 或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 处理(10 ng/ml,16 小时;+)的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 TRIM5α (D6Z8L) Rabbit mAb(泳道 3)对 RL 细胞提取物中的 TRIM5α 进行免疫沉淀分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 TRIM5α (D6Z8L) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb 在 Leica® Bond Rx上对石蜡包埋的人乳腺导管癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    对 THP-1 细胞提取物磷酸-SAMHD1 (Thr592) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Phospho-SAMDHD1 (Thr592) (D7O2M) Rabbit mAb。使用 Phospho-SAMDHD1 (Thr592) (D7O2M) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb,对石蜡包埋的 T84 细胞沉淀物(左,阳性)和 HCT116 细胞沉淀物(右,阴性)进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人淋巴节点进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Phospho-SAMHD1 (Thr592) (D7O2M) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线),对未经处理(绿色)或已经 TPA(80 nM,16 小时;红色)处理的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb,对石蜡包埋的 HeLa 细胞沉淀物(未处理(左)或用 Human Interferon-alpha1 (hIFN-alpha1) #8927 处理(右))进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HeLa(左)和 RPMI 8226(右)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 Phospho-SAMHD1 (Thr592) (D7O2M) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线),对 Jurkat 细胞(蓝色)和 THP-1 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人非小细胞肺癌进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人脾脏进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在下,使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌进行免疫组织化学分析。
    Host Cell Viral Restriction Factor Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 MX1 (D3W7I) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人正常脾进行免疫组织化学分析。