Revision 1

#56612Store at -20C

1 个试剂盒

(7 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 14074 20 µl 65-78 kDa Rabbit IgG
TAZ (D3I6D) Rabbit mAb 70148 20 µl 50 kDa Rabbit IgG
Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb 34648 20 µl 55 kDa Rabbit IgG
PTPN14 (D5T6Y) Rabbit mAb 13808 20 µl 160 kDa Rabbit IgG
Merlin (D3S3W) Rabbit mAb 12888 20 µl 70 kDa Rabbit IgG
MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 14946 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
FRMD6 (D8X3R) Rabbit mAb 14688 20 µl 78 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Hippo Pathway Proteins Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting proteins that have been identified as upstream regulators of the Hippo Signaling Pathway. The kit provides enough antibody to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The Hippo Signaling Pathway is an evolutionarily conserved signaling cascade that regulates cell, tissue and organ growth in response to diverse environmental cues, including cell density, mechanical stress, growth factors and cytokines, and metabolic signaling (1,2). In mammals, the core components of this pathway are YAP and TAZ, transcriptional co-activators that regulate the expression of target genes that control cell proliferation and survival (3). The transcriptional control of YAP/TAZ target genes is regulated through a complex kinase cascade involving mammalian sterile-20-like kinases (MST1/2), LATS1/2 kinases and key adaptor proteins. Phosphorylation of YAP and TAZ by LATS kinases results in cytoplasmic sequestration of YAP and TAZ, inhibiting transcriptional activation of their target genes. A number of proteins have been identified that function upstream of MST1/2 and LATS1/2 to influence LATS-mediated phosphorylation of YAP/TAZ. These include the tumor suppressor protein Merlin (4), the FERM-domain containing protein 6 (FRMD6/Willin) (5), the LIM-domain containing adaptor protein Ajuba (6,7), and the protein tyrosine phosphatase PTPN14 (8).

  1. Meng, Z. et al. (2016) Genes Dev 30, 1-17.
  2. Watt, K.I. et al. (2017) Front Physiol 8, 942.
  3. Fu, V. et al. (2017) Curr Opin Cell Biol 49, 99-107.
  4. Su, T. et al. (2017) Dev Cell 40, 478-490.
  5. Angus, L. et al. (2012) Oncogene 31, 238-50.
  6. Das Thakur, M. et al. (2010) Curr Biol 20, 657-62.
  7. Reddy, B.V. and Irvine, K.D. (2013) Dev Cell 24, 459-71.
  8. Liu, X. et al. (2013) Oncogene 32, 1266-73.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    Revision 1
    #56612

    Hippo 通路:Upstream Signaling Antibody Sampler Kit

    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对 RL 细胞(蓝色)和 A-204 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 对 MCF-7 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse small intestine labeled with YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (left, green) and co-labeled with ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (right, blue).
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse kidney labeled with YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (left, green) and co-labeled with ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (right, blue).
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse cerebellum labeled with YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (left, green) and co-labeled with ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (right, blue).
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    对 HeLa 细胞提取物的 TAZ 蛋白进行的免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb。使用 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 用于检测,以避免与 IgG 交叉反应。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb(上)、Ezrin/Radixin/Moesin Antibody #3142(中间)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对 PC-3 细胞以及野生型和 Nf2 (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物进行蛋白质印迹分析。(MEF wt 和 MEF Nf2 (-/-) 细胞由 MGH Cancer Center 和 Harvard Medical School 的 Andrea McClatchey 博士和 Andrew Gladden 博士惠赠)。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 PTPN14 (D5T6Y) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照的 HeLa 细胞(泳道 1)或 YAP 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。YAP 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 YAP 的特异性。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 FRMD6 (D8X3R) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb,对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb(上图)和 GAPDH (D16H11) XP® #5174(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。正如预期一样,Raji 细胞中 TAZ 呈阴性。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb(泳道 3),对小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物 merlin 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。正如预计的一样,RL 细胞的 YAP 蛋白表达呈阴性。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 对血清饥饿整晚之后经赋形剂 (-) 或 Staurosporine #9953(1 μM,4 小时;+)处理的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Staurosporine 可诱导全长 MST1 由半胱天冬酶介导的裂解,从而产生一个该抗体可检测的 37 kDa 氨基末端片段和一个不可检测到的 18 kDa 羧基末端片段。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    对来自 PANC-1 细胞提取物的Ajuba 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是 10 % input,泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900,而泳道 3 是 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb。使用 Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对 NCI-H2052 细胞的交联染色质和 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 SMYD3 内结合,SMYD3 是一种已知的 TAZ 靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。欲知其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Merlin (D3S3W) Rabbit mAb(绿色)对 PC-3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(泳道 3)对 A-204 细胞提取物 YAP 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 用作二抗。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb(泳道 3)对 Ramos 细胞提取物 MST1 进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对 NCI-H2052 细胞的交联染色质和 TAZ (D3I6D) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在染色体 1(上图)内的结合,包括 TAZ 的已知靶基因 SMYD3(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    在 Leica® BOND Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 NCI-H2052 细胞的交联染色质与 TAZ (D3I6D) Rabbit mA 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers #14927、Human SMYD3 intron 2 primers 与 SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers #14928,通过实时 PCR对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    在 Leica® BOND Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(顶部图)或 TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804(底部图)对石蜡包埋的人非小细胞肺癌(左图)、结肠癌病例 1(中图)或结肠癌病例 2(右图)进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人良性前列腺增生细胞进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(左图)或 YAP Antibody(右图)对石蜡包埋的小鼠小肠进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测 YAP 蛋白上独特的非重叠表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(顶部图)or TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804(底部图)对石蜡包埋的未转染(左图,YAP/TAZ 低)或 YAP 转染(中图)或 TAZ 转染(右图)的 BEN 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的野生型 293T 细胞沉淀物(左图,阳性)或敲除 YAP/TAZ 的 293T 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PANC-1(左图)和 RL(右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(绿色)对低汇合度 MCF 10A 细胞(左图)、高汇合度 MCF 10A 细胞(中图)和 YAP 呈阴性的 RL 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。下图中的蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。在低汇合度(增殖)细胞中观察到越来越多的 YAP 蛋白位于胞核。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 CTGF 内结合,CTGF 是一种已知的 YAP 靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 6(上图)内的结合,包括 YAP 的已知靶标基因 CTGF(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-2052 细胞中提取的交联染色质与 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers #14927、Human SMYD3 intron 2 primers 与 SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers #14928,通过实时 PCR对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 YAP 的已知靶标基因 TSPAN2(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 41 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 1 (上图)内的结合,包括 YAP 的已知靶基因 TSPAN2(下图)(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    Hippo Pathway: Upstream Signaling Antibody Sampler Kit: Image 42 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,通过 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 C1D 下游引物、人 TSPAN2 上游引物和人 ITM2A 下游引物进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。