Revision 2

#4445Store at -20C

1 个试剂盒

(7 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 3495 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb 12741 20 µl 14, 16 kDa Rabbit IgG
Atg5 (D5F5U) Rabbit mAb 12994 20 µl 55 kDa Rabbit IgG
Atg12 (D88H11) Rabbit mAb 4180 20 µl 16, 55 kDa Rabbit IgG
Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 8089 20 µl 66, 68 kDa Rabbit IgG
Atg7 (D12B11) Rabbit mAb 8558 20 µl 78 kDa Rabbit IgG
Atg3 Antibody 3415 20 µl 40 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Autophagy Antibody Sampler Kit provides an economical means to investigate the molecular machinery of autophagy within the cell. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two Western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Autophagy is a catabolic process for the autophagosomic-lysosomal degradation of bulk cytoplasmic contents (1,2). Autophagy is generally activated by conditions of nutrient deprivation but has also been associated with a number of physiological processes including development, differentiation, neurodegeneration, infection, and cancer (3). The molecular machinery of autophagy was largely discovered in yeast and referred to as autophagy-related (Atg) genes. Formation of the autophagosome involves a ubiquitin-like conjugation system in which Atg12 is covalently bound to Atg5 and targeted to autophagosome vesicles (4-6). This conjugation reaction is mediated by the ubiquitin E1-like enzyme Atg7 and the E2-like enzyme Atg10 (7,8).

  1. Reggiori, F. and Klionsky, D.J. (2002) Eukaryot Cell 1, 11-21.
  2. Codogno, P. and Meijer, A.J. (2005) Cell Death Differ 12 Suppl 2, 1509-18.
  3. Levine, B. and Yuan, J. (2005) J Clin Invest 115, 2679-88.
  4. Mizushima, N. et al. (1998) J Biol Chem 273, 33889-92.
  5. Mizushima, N. et al. (1998) Nature 395, 395-8.
  6. Suzuki, K. et al. (2001) EMBO J 20, 5971-81.
  7. Tanida, I. et al. (1999) Mol Biol Cell 10, 1367-79.
  8. Shintani, T. et al. (1999) EMBO J 18, 5234-41.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    Revision 2
    #4445

    Autophagy Antibody Sampler Kit

    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image

    使用 LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb #12741 对 3T3 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 2-40 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。

    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    对 Jurkat 细胞提取物的 Atg16L1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 进行沉淀,泳道 3 为 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb #8089。使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb 对未处理 (-) 或用 Torin 1 处理(250 nM 处理 4 小时;+)的 RD 细胞进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Atg5 (D5F5U) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Atg3 Antibody 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Beclin-1 (D40C5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Atg12 (D88H11) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Atg7 (D12B11) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb 对未处理 (-) 或用氯喹处理(50 μM,过夜;+)的 HeLa 、NIH/3T3 和 KNRK 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Atg5 (D5F5U) Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对野生型 MEF (wt) 或 Atg5 敲除 (Atg5-/-) 的 MEF 提取物进行蛋白质印迹分析。Atg5-/- MEF 由来自Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 的Ramnik Xavier博士惠赠。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Atg3 Antibody 对转染空载或转染小鼠 Atg3 的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb #3495(上)或 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125(下)对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® Beclin-1 siRNA I #6222 (+) 或 SignalSilence® Beclin-1 siRNA II (+) 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Beclin-1 (D40C5) XP® Rabbit mAb 可确认 Beclin-1 的表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用作观察上样量和 Beclin-1 siRNA 的特异性。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或带有 myc 标签的人 Atg16L1β (hAtg16L1β-Myc; +) 表达载体或小鼠 Atg16L1α  (mAtg16L1α; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。该 myc 标记的人 Atg16L1β 表达载体由University of California Berkeley Qing Zhong 博士友情提供。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Atg7 (D12B11) Rabbit mAb(上图)或 α-Tubulin (11Η10) Rabbit mAb #2125(下图)对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-) 或 SignalSilence® Atg7 siRNA I #6604 (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Atg7 (D12B11) Rabbit mAb 证实 Atg7 表达沉默,而使用 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 作为内参对照。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠前列腺组织进行免疫组织化学分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 Atg5 (D5F5U) Rabbit mAb (泳道 3),对 PANC-1 细胞提取物免疫沉淀 Atg5。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Atg5 (D5F5U) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 作为二抗以避免与兔 IgG 的交叉反应性。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Atg16L1 (D6D5) Rabbit mAb(绿色)对 EBSS 饥饿的 PANC-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    在存在对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)的情况下,使用 LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的对照(左图)或用氯喹处理(右图)的 NIH/3T3 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb (绿色)和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #8046(红色)对 HeLa(上)和 C2C12(下)细胞进行共聚焦免疫荧光分析,两种细胞用氯喹处理(50 μM,过夜;左)、用 EBSS(3 小时,中)营养饥饿处理或未处理(右)。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Autophagy Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 LC3A/B (D3U4C) Rabbit mAb 对未处理(蓝色)或用氯喹处理(50 µM 处理 16 小时;绿色)的 HeLa 细胞进行流式细胞术分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 作为二抗。