Revision 2
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P10275

Entrez-Gene Id:

367

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 5153 100 µl H 110 Rabbit IgG
Phospho-Androgen Receptor (Ser258) (E4L1I) Rabbit mAb 16969 100 µl H 110 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Androgen receptor (AR), a zinc finger transcription factor belonging to the nuclear receptor superfamily, is activated by phosphorylation and dimerization upon ligand binding (1). This promotes nuclear localization and binding of AR to androgen response elements in androgen target genes. Research studies have shown that AR plays a crucial role in several stages of male development and the progression of prostate cancer (2,3).

Upon ligand binding, AR becomes phosphorylated on many residues, including Ser258 (4).

  1. Li, J. and Al-Azzawi, F. (2009) Maturitas 63, 142-8.
  2. Avila, D.M. et al. (2001) J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 76, 135-142.
  3. Montgomery, J.S. et al. (2001) J. Pathol. 195, 138-146.
  4. Gioeli, D. et al. (2002) J Biol Chem 277, 29304-14.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意，否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件，除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受， 否书均被拒书，并且无效。

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 2
    #25015

    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet

    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb（下图）对 LNCaP (AR+)、VCaP (AR & AR-V7+)、22Rv1 (AR & AR-V7+) 和 PC-3 (AR-) 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb #5153 对 LNCaP 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-Androgen Receptor (Ser258) (E4L1I) Rabbit mAb（上图）或 Androgen Receptor (D6F11) XP®5 Rabbit mAb #3（下图），对 LNCaP 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析，这些细胞已在无酚红培养基和活性炭剥离的 % FBS 中培育 5153 天，然后未经处理（-）、经二氢睾酮 （DHT）处理（＋）或经 DHT 处理并且随后用 λ 磷酸酶和牛小肠磷酸酶 （CIP）（＋）处理 。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（上图）和 β-Actin Antibody #4967（下图）对 LNCaP (AR+)、MCF7 (AR+)、PC-3 (AR-) 和 DU 145 (AR-) 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了雄激素受体的已知靶基因 KLK2 内的结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    对来自 LNCaP 细胞提取物的磷酸-雄激素受体 (Ser258) 蛋白进行免疫沉淀分析。将细胞在无酚红培养基和活性炭剥离的 5% FBS 中生长 3 天，然后用二氢睾酮（DHT）处理（5 nM，6 小时）。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Phospho-Androgen Receptor (Ser258) (E4L1I) Rabbit mAb。使用 Phospho-Androgen Receptor (Ser258) (E4L1I) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 LNCaP（AR+，左图）和 DU145（AR-，右图）进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了染色体 19（上图）内的结合，包括雄激素受体的已知靶基因 KLK2（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，用来自 LNCaP 细胞的交联染色质进行染色质免疫沉淀分析，这些细胞已在无酚红培养基和活性炭剥离的 5% FBS 中培养 3天，然后用双氢睾酮（DHT）（5 nM， 6 小时）及 Phospho-Androgen Receptor (Ser258) (E4L1I) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729​ 处理。使用 SimpleChIP® Human KLK3 Promoter Primers #32784 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #66362，对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #86652 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP® Human KLK2 Intron 1 Primers #62086 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时聚合酶链反应 (PCR) 对富集 DNA 进行量化分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 12 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（绿色），对 LNCaP（阳性，左）和 DU145（阴性，右）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 13 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对 DU-145 细胞（蓝色）和 LNCaP 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 14 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒（磁珠法） #9005 对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 3 天，随后用双氢睾酮 (DHT，10 nM) 处理 4 小时的 LNCaP 细胞的交联染色质与雄激素受体 (D6F11) XP® 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在雄激素受体的已知靶基因 KLK2 内结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 15 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒（磁珠法） #9005 对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 3 天，随后用双氢睾酮 (DHT，10 nM) 处理 4 小时的 LNCaP 细胞的交联染色质与雄激素受体 (D6F11) XP® 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示了染色体 19（上图）内的结合，包括雄激素受体的已知靶基因 KLK2（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PhosphoPlus® Androgen Receptor (Ser258) Antibody Duet: Image 16 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对在无酚红培养基和 5% 炭剥离的 FBS 中培养 3天，随后用 双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞中提取的交联染色质，在加入 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729​ 后，进行染色质免疫沉淀。使用 using SimpleChIP® Human KLK2 Intron 1 Primers #62086, SimpleChIP® Human KLK3 Promoter Primers #32784 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486， 通过实时 PCR 对富集 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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