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#9778Store at -20C

 

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Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Raptor (24C12) Rabbit mAb 2280 40 µl 150 kDa Rabbit 
mTOR (7C10) Rabbit mAb 2983 40 µl 289 kDa Rabbit IgG
RagB (D18F3) Rabbit mAb 8150 40 µl 40 kDa Rabbit IgG
RagA (D8B5) Rabbit mAb 4357 40 µl 30 kDa Rabbit IgG
RagD Antibody 4470 40 µl 50 kDa Rabbit 
RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb 5466 40 µl 50 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Rag Protein Antibody Sampler Kit provides an economical means to evaluate the regulation of mTORC1 signaling by such proteins as Raptor, RagA, RagB, RagC, and RagD. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform four Western blot experiments per primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The mTORC1 kinase complex is a critical regulator of cell growth (1,2). Its activity is modulated by energy levels, growth factors, and amino acids via signaling through Akt, MAPK, and AMPK pathways (3,4). Recent studies found that the four related GTPases, RagA, RagB, RagC, and RagD, interact with raptor within the mTORC1 complex (1,2). These interactions are both necessary and sufficient for mTORC1 activation in response to amino acid signals (1,2).

  1. Sancak, Y. et al. (2008) Science 320, 1496-501.
  2. Kim, E. et al. (2008) Nat Cell Biol 10, 935-45.
  3. Hay, N. and Sonenberg, N. (2004) Genes Dev 18, 1926-45.
  4. Wullschleger, S. et al. (2006) Cell 124, 471-84.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #9778

    Rag Protein Antibody Sampler Kit

    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Western blot analysis of extracts from various cell lines using mTOR (7C10) Rabbit mAb.
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb #2983 对 Hela 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 66-440 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Raptor (24C12) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    对 MCF-7 细胞提取物的 mTOR 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 mTOR (7C10) Rabbit mAb。使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 RagA (D8B5) Rabbit mAb 对 293 和 PANC-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 RagD Antibody 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 RagB (D18F3) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb #2983 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 ，对转染 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® mTOR siRNA II (+) 的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。mTOR (7C10) Rabbit mAb 确认 mTOR 表达沉默，而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用于 mTOR siRNA 的上样量和特异性对照。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 RagA (D8B5) Rabbit mAb 对 mIMCD3、KNRK 和 COS7 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠结肠进行免疫组织化学分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌（可显示细胞质定位）进行免疫组织化学分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    在对照肽（左图）或 mTOR Blocking Peptide #1072（右图）存在的情况下，使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    在对照肽（左）和抗原特异性肽（右）存在的情况下，使用 RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脑进行免疫组织化学分析。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb（绿色）对小鼠胚胎成纤维 (MEF) 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Rag Protein Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 mTOR (7C10) Rabbit mAb（实线）对 A549 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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