Revision 1

#9955Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 2855 20 µl 15 to 20 kDa Rabbit IgG
Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb 4923 20 µl 15-20 kDa Rabbit IgG
Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody 9451 20 µl 15 to 20 kDa Rabbit 
4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 9644 20 µl 15-20 kDa Rabbit IgG
4E-BP2 Antibody 2845 20 µl 15 to 20 kDa Rabbit 
Phospho-4E-BP1 (Thr70) Antibody 9455 20 µl 15 to 20 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The 4E-BP Antibody Sampler Kit provides an economical means to investigate regulation of cap-dependent translation within the cell. The kit contains primary and secondary antibodies to perform two Western blots with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Translation repressor protein 4E-BP1 (also known as PHAS-1) inhibits cap-dependent translation by binding to the translation initiation factor eIF4E. Hyperphosphorylation of 4E-BP1 disrupts this interaction and results in activation of cap-dependent translation (1). Both the PI3 kinase/Akt pathway and FRAP/mTOR kinase regulate 4E-BP1 activity (2,3). Multiple 4E-BP1 residues are phosphorylated in vivo (4). While phosphorylation by FRAP/mTOR at Thr37 and Thr46 does not prevent the binding of 4E-BP1 to eIF4E, it is thought to prime 4E-BP1 for subsequent phosphorylation at Ser65 and Thr70 (5).
4E-BP2 and 4E-BP3 share high sequence homology with 4E-BP1, including conservation of the major FRAP/mTOR-dependent phosphorylation sites. Preliminary data suggests that phosphorylation of 4E-BP2 is regulated in a similar manner to that of 4E-BP1, although phosphorylation of this protein has not been as extensively studied (6).

  1. Pause, A. et al. (1994) Nature 371, 762-7.
  2. Brunn, G.J. et al. (1997) Science 277, 99-101.
  3. Gingras, A.C. et al. (1998) Genes Dev 12, 502-13.
  4. Fadden, P. et al. (1997) J Biol Chem 272, 10240-7.
  5. Gingras, A.C. et al. (1999) Genes Dev 13, 1422-37.
  6. Lin, T.A. and Lawrence, J.C. (1996) J. Biol. Chem. 271, 30199-30204.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #9955

    4E-BP Antibody Sampler Kit

    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    对 MCF-7 细胞提取物的磷酸化 4E-BP1 (Ser65) 进行免疫沉淀分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且进行氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后,用 100 nM 胰岛素处理细胞 30 分钟。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Normal Rabbit IgG #2729,泳道 3 为 Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody。使用 Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451 进行蛋白质印迹法分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from HepG2 cells using 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb #9644. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 2-40 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 4E-BP2 Antibody(上)或 4E-BP1 Antibody #9452(下)对来自未处理的或用诺考达唑(100 ng/ml,16 小时)处理的 A673 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。用 λ 磷酸酶 NEB#P0753 (10,000U/ml , 1 小时)对提取物进行处理,以使两种蛋白质去磷酸化。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 4E-BP1 Antibody #9452(上)和 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Antibody #2855(下)对来自 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且给予氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后,不处理 (-) 或用 100 nM 胰岛素处理 (+) 细胞 30 分钟。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb(上)、Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Antibody #9459(中)和 4E-BP1 Antibody #9452(下)对用 λ 磷酸酶或 20 % FBS(如图所示)处理的 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 4E-BP1 Antibody #9644(下)和 Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451(上)对来自 293 个细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞在无血清培养基中饥饿 24 小时并且给予氨基酸剥夺处理 1 小时。补充氨基酸 1 小时。随后,不处理 (-) 或用 100 nM 胰岛素处理 (+) 细胞 30 分钟。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-4E-BP1 (Thr70) Antibody(上)或 4E-BP1 Antibody #9452(下)对来自未经处理或经 20% FBS 按照图示分钟数处理的 293 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照的 HeLa 细胞(泳道 1)或 4E-BP1 编码基因出现靶向突变的 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。突变型 HeLa 细胞的 4E-BP1 分子量变化证实了抗体对 4E-BP1 的特异性。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 4E-BP2 Antibody 或 4E-BP1 Antibody #9452 对细菌表达的 GST-4E-BP1 和来自 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb(绿色),对经历血清饥饿(最左);经历血清饥饿并用 U0126#9903(10 μM,2 小时)、LY294002 #9901(50 μM,2 小时)和 Rapamycin #9904(10 nM,2 小时)(中间,左)处理;经历血清饥饿并用 l 磷酸酶(10,000 U/mL,2 小时)(中间,右侧)处理的 293​ 无意义shRNA细胞和用 U0126#9903(10 μM,2 小时),LY294002 #9901(50 μM,2 小时)和 Rapamycin #9904(10 nM,2 小时)(最右)处理的 293 shRNA 4E-BP1/2 KO 进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析,显示胞质定位和核定位。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) 兔单抗对石蜡包埋的人淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用与非特异性阴性对照抗体(红色)作对比的 Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb,对未经处理(蓝色)或经 λ 磷酸酶处理的(绿色) COS 细胞进行流式细胞分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    在对照肽(左)或 4E-BP1 blocking peptide #1053(右)存在的情况下,使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对 SignalSlide (TM) Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101(未经处理(左图)或经 LY294002 处理(右图)的石蜡包埋的 LNCaP 细胞)进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肝细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 4E-BP2 Antibody 对石蜡包埋的人滤泡性癌(甲状腺)进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    在对照肽(左)或 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Blocking Peptide #1052(右)的存在下,使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 4E-BP1/2 野生型(左)或 4E-BP1 敲除(右)型小鼠脾脏进行免疫组织化学分析。4E-BP 野生型和敲除组织由加拿大麦吉尔大学 Nahum Sonenberg 博士友情提供。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb(绿色)对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb(绿色),对表达非靶向性 shRNA(底部)或靶向 4E-BP1/2 的 shRNA(顶部)的 293 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。为证实磷酸特异性,细胞以 LY294002 #9901、U0126 #9903 和 Rapamycin #9904(50 μM;10 μm;10 nM;2小时)(左)组成的抑制剂混合物处理、胰岛素 (100 nM,30 分钟;中间)刺激、或胰岛素刺激后(右)用λ-磷酸酶处理。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution (#4087)。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb#9644(绿色),对表达非靶向性 shRNA(左)或靶向 4E-BP1/2 的 shRNA(右)的 293 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4084。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对转染对照 shRNA(绿色)或 4E-BP1-特异性 shRNA(蓝色)的 293 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')₂ Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    4E-BP Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Phospho-4E-BP1 (Thr36/46) (236B4) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(绿色)或已经过 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903(50 μM、1 μM 和 10 μM,2 小时;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。