Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
10179S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 猴
使用与人 TAZ 蛋白的 Asp362 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
YAP(Yes 相关蛋白,YAP65)的首次鉴定基于其与 Yes 的 SH3 域结合的能力。它还结合其他包含 SH3 结构域的蛋白,如 Nck、Crk、Src 和 Abl (1)。除了 SH3 结合基序,YAP 还有一个 PDZ 互作基序、一个卷曲螺旋结构域和许多 WW 结构域 (2-4)。YAP 的初步研究都指出,它在锚定和靶向特定亚细胞区室中发挥作用。后续研究表明,YAP 是一个转录共激活蛋白,因为其 WW 结构域与转录因子 PEBP2 和其他转录因子的 PY 基序 (PPxY) 相互作用 (5)。作为一个转录共激活蛋白,YAP 现在被广泛认为是 Hippo 通路的一个中央介导物,从而在组织生长和器官大小的调节中发挥功能性和广泛保守的作用 (6-8)。LATS 激酶磷酸化许多位点(如 Ser109 和 Ser127)会促进 YAP 从细胞核转位到细胞浆,从而通过结合 14-3-3 蛋白被隔离 (7-9)。这些 LATS 诱导的磷酸化活动能让 YAP 进一步被邻近磷酸降解决定子中的 CK1δ/ε 磷酸化,从而诱发 YAP 蛋白酶体降解 (10)。TAZ 是一种带有 PDZ 结合基序的转录共激活蛋白,通过与 14-3-3 蛋白相互作用进行调控(11)。TAZ 与 Yes 相关蛋白 (YAP) 的 WW 结构域具有同源性(11)。TAZ 经证实能通过与转录因子 Runx2 和 PPARγ 的相互作用来调控间充质干细胞 (MSC) 增殖和分化之间的转换。这个过程对正常组织发育和肿瘤形成的预防非常关键。鉴于在决定 MSC 命运中的作用,TAZ 可能与 MSC 分化失衡所引起的许多人体疾病具有临床相关性 (12,13)。Hippo 信号转导通路中的核心激酶 LATS1/2 磷酸化可负调控 TAZ,该通路可调控干细胞发育、组织生长和肿瘤发生 (14)。
探索与本品相关的通路。
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