Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
12020S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与人波形蛋白的 Arg45 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
细胞骨架由三种胞内纤维组成:微丝(肌动蛋白丝)、中间纤丝和微管。根据细胞的特异性表达将中间纤丝分为以下几种主要类型:细胞角蛋白(上皮细胞)、胶质纤丝酸性蛋白 (GFAP)(胶质细胞)、结蛋白(骨骼、内脏和某些血管平滑肌细胞)、波形蛋白(间质来源)以及神经丝(神经元)。GFAP 和波形纤维蛋白形成星形胶质细胞中的中间纤丝,并且调节其运动性和形状 (1)。具体而言,波形纤维蛋白纤丝在发育早期阶段存在,而 GFAP 纤丝是分化和成熟的脑星形细胞的特征。因此,GFAP 常用作源自星形细胞的颅内和椎管内肿瘤的标记物 (2)。研究表明,波形蛋白存在于肉瘤而非癌细胞中,其表达在与其他标志物的接合处被发现,可区分两者 (3)。在胞外刺激下,波形蛋白的动态结构会发生变化和空间重组,有助于协调不同的信号转导通路 (4)。在血清素的刺激下,平滑肌细胞中的波形蛋白 Ser56 磷酸化会调节波形蛋白纤丝的结构重排 (5,6)。波形蛋白和其他中间纤丝的重构在淋巴细胞黏附和内皮细胞迁移期间非常重要 (7)。
在有丝分裂期间,CDK1 磷酸化波形蛋白 Ser56。这种磷酸化为波形蛋白-PLK 相互作用提供一个 PLK 结合位点。PLK 进一步磷酸化波形蛋白 Ser83(可作为一个记忆磷酸化位点),并在波形蛋白纤丝分解中发挥调节性作用 (8,9)。此外,使用不同软组织肉瘤细胞进行的研究表明,Akt1 磷酸化波形蛋白 Ser39 会增强细胞迁移和存活,表明波形蛋白是软组织肉瘤靶向治疗的一个潜在靶标 (10,11)。
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