Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
10584S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴
非洲爪蟾蜍, 斑马鱼
使用与 Lys27 三甲基化组蛋白 H3 氨基末端相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
核小体由四个核心组蛋白(H2A、H2B、H3 和 H4)组成,是染色质的主要组成部分。最初被认为可作为 DNA 包装的静态支架的组蛋白现在已被证明是动态蛋白,可进行多种类型的翻译后修饰,包括乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化 (1)。组蛋白甲基化是形成基因组的活跃和非活跃区域的主要决定因素,并且在发育期间基因组的正确编程过程中发挥关键作用 (2,3)。组蛋白 H3 (Arg2, 17, 26) 和 H4 (Arg3) 的精氨酸甲基化可促进转录激活,并由蛋白精氨酸甲基转移酶 (PRMTs) 家族介导,该家族包括辅助激活因子 PRMT1 和 CARM1 (PRMT4) (4)。与此相反,已确定更多样化的组蛋白赖氨酸甲基转移酶,除了其中某个外其余的都含有一个保守催化 SET 结构域,该结构域最初在果蝇 Su(var)3-9、zeste 增强子和 Trithorax 蛋白中得以确认。赖氨酸甲基化主要发生在组蛋白 H3 (Lys4 位点, 9, 27, 36, 79) 和 H4 (Lys20 位点) 中,并已确定与转录激活和沉默有关 (4)。这些赖氨酸残基的甲基化可协调染色质修饰酶的募集,这些酶含有甲基赖氨酸结合模块,例如克罗莫结构域 (HP1, PRC1)、PHD fingers (BPTF, ING2)、tudor 结构域 (53BP1) 和 WD-40 结构域 (WDR5) (5-8)。PADI4、LSD1、JMJD1、JMJD2 和 JHDM1 等组蛋白脱甲基酶的发现表明:甲基化是可逆的表观遗传标记物 (9)。
探索与本品相关的通路。
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