Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
24483S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与人 SMAD4 蛋白相对应的重组蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
信号转导分子的 SMAD 家族成员是重要的细胞内通路组分,可将 TGF-β 信号从细胞表面传递至胞核。SMAD 的三种不同类型为:受体调节的 SMAD (R-SMAD),包括 SMAD1、2、3、5、9;常见转导介质 SMAD (co-SMAD),SMAD4;以及拮抗或抑制性 SMAD (I-SMAD)、SMAD6 和 7 (1-5)。活化型 I 受体与特异性 R-SMAD 有关,并在羧基末端的保守 SSXS 基序上对其进行磷酸化。磷酸化的 R-SMAD 从受体上分离,并与 SMAD4 形成一个异聚复合体,从而启动异聚 SMAD 复合体向胞核的移位。一旦进入胞核,SMAD 就会募集多种 DNA 结合蛋白来调节转录活性 (6-8)。
探索与本品相关的通路。
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