Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
64117S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 SHP-2 蛋白中 Tyr542 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
SHP-2 (PTPN11) 是一种普遍表达的非受体蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTP)。在细胞生长、分化、迁移和死亡的调控中,它参与生长因子、细胞因子、激素、抗原以及胞外基质等受体的下游信号转导活动 (1)。SHP-2 的激活及其与 Gab1 的结合对多个生长因子受体和细胞因子的下游 Erk 持续激活非常关键 (2)。除了在 Gab1 介导的 Erk 激活中发挥作用,SHP-2 还通过去磷酸化 Gab1的 p85 结合位点来减弱依赖于 EGF 的 PI3K 激酶激活 (3)。在生长因子受体激活时,SHP-2 在其羧基末端的 Tyr542 和 Tyr580 位点被磷酸化 (4)。这些磷酸化活动被认为会解除基底抑制,并刺激 SHP-2 酪氨酸磷酸酶活性 (5)。相应基因突变会导致两种临床症状相似的疾病(努南综合症和豹皮综合征),这可能是由于 MAPK 调节异常所致 (6)。
探索与本品相关的通路。
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