Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
12468S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 Met 的 Tyr1234/1235 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Met 是肝细胞生长因子(HGF,也称散射因子)的一种高亲和性酪氨酸激酶受体,也是一种由 45 kDa α 和 145 kDa β 亚基构成的二硫键连接异二聚体 (1,2)。α-亚基和 β-亚基的氨基末端区域构成胞外域。β-链的剩余部分横跨质膜,包含一个具有酪氨酸激酶活性的胞质区。Met 与 HGF 相互作用会导致多个酪氨酸自磷酸化,继而募集多种下游信号转导组分,包括 Gab1、c-Cbl 和 PI3 激酶 (3)。这一系列基础活动对于所有与 Met 激酶活性相关的生物功能十分重要。加入细胞质 Tyr1003 位点的磷酸盐对于 Met 蛋白质泛素化和降解十分必要 (4)。Met 激酶结构域中在 Tyr1234/1235 位点的磷酸化对于激酶激活十分关键。Met 胞质域中在 Tyr1349 位点的磷酸化为 Gab1 提供一个直接结合位点 (5)。研究表明,在肾癌、结肠癌和乳腺癌等多种癌症中发现 Met 水平和/或酪氨酸激酶活性发生变化。因此,研究人员得出结论,Met 是一个具有吸引力的潜在癌症诊治靶标 (6,7)。
探索与本品相关的通路。
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