免疫组织化学 Leica BOND 实验步骤

重要事项：请参阅产品数据表首页或产品网页上的“应用”版块，以确定某件产品是否已经验证且获批在 Leica BOND 上使用。如果是，请参阅产品特定实验步骤，了解具体说明。对于没有经验证的 Leica BOND 实验步骤的产品，下面所列的条件可作为一个起点。

	步骤	试剂	时间/温度
1	脱蜡	BOND Dewax Solution、100% 乙醇、BOND Wash Solution	预编程的 Leica BOND
2	抗原修复	BOND 表位修复 ER2 溶液	20 分钟，100˚C | 实验步骤：用 ER2 进行 HIER 20 分钟
3	过氧化物封闭液	Refine Detection Kit Peroxide Block*	5 分钟
	洗涤	BOND 洗涤液	3x 0:00 分钟
4	蛋白封闭液（可选）	#5425 NGS 或 #15019 Animal-Free Blocking Solution	20 分钟
5	一抗	用 #8112 SignalStain® Antibody Diluent 稀释	30 分钟
	洗涤	BOND 洗涤液	3x 2:00 分钟
不适用	Post Primary Mouse Linker	Refine Detection Kit Post Primary*	不适用于兔抗体，小鼠抗体为 10 分钟
6	二次检测	Refine Detection Kit Polymer*	10 分钟
	洗涤	BOND 洗涤液/去离子水	定制（参见下文）
7a	可视化	Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*	0:00 分钟
7b	可视化	Refine Detection Kit Mixed DAB Refine*	10 分钟
	洗涤	去离子水	3x 0:00 分钟
8	复染	Refine Detection Kit Hematoxylin*	5 分钟
	洗涤	去离子水	0:00 分钟
	洗涤	BOND 洗涤液	0:00 分钟
	洗涤	去离子水	0:00 分钟
9	脱水（离线）：
	在 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 秒。
	在 100% 乙醇中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
	在二甲苯中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
10	用盖玻片和 #14177 SignalStain® Mounting Medium 封片。
	可选订制洗涤：	BOND 洗涤液	2:00
		BOND 洗涤液	分配器类型：打开 0：00
		BOND 洗涤液	2:00
		BOND 洗涤液	分配器类型：打开 0：00
		BOND 洗涤液	0:00
		去离子水	0:00

*BOND Polymer Refine Detection Kit（货号：DS9800）中所含的试剂

Leica 是 Leica Microsystems IR GmbH 的注册商标。

BOND 是 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd. CST 和 Leica Microsystems IR GmbH 或 Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd 之间没有隐含的附属或赞助关系。

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