Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P46937

Entrez-Gene Id:

10413

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 14074 100 µl H M R Hm Mk 65-78 Rabbit IgG
Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb 13008 100 µl H M R 65-78 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

YAP (Yes-associated protein, YAP65) was first identified based on its ability to associate with the SH3 domain of Yes. It also binds to other SH3 domain-containing proteins such as Nck, Crk, Src, and Abl (1). In addition to the SH3 binding motif, YAP contains a PDZ interaction motif, a coiled-coil domain, and WW domains (2-4). While initial studies of YAP all pointed towards a role in anchoring and targeting to specific subcellular compartments, subsequent studies showed that YAP is a transcriptional co-activator by virtue of its WW domain interacting with the PY motif (PPxY) of the transcription factor PEBP2 and other transcription factors (5). In its capacity as a transcriptional co-activator, YAP is now widely recognized as a central mediator of the Hippo Pathway, which plays a fundamental and widely conserved role in regulating tissue growth and organ size (6-8). Phosphorylation at multiple sites (e.g., Ser109, Ser127) by LATS kinases promotes YAP translocation from the nucleus to the cytoplasm, where it is sequestered through association with 14-3-3 proteins (7-9). These LATS-driven phosphorylation events serve to prime YAP for subsequent phosphorylation by CK1δ/ε in an adjacent phosphodegron, triggering proteasomal degradation of YAP (10).

  1. Sudol, M. (1994) Oncogene 9, 2145-52.
  2. Mohler, P.J. et al. (1999) J Cell Biol 147, 879-90.
  3. Espanel, X. and Sudol, M. (2001) J Biol Chem 276, 14514-23.
  4. Sudol, M. et al. (1995) FEBS Lett 369, 67-71.
  5. Yagi, R. et al. (1999) EMBO J 18, 2551-62.
  6. Dong, J. et al. (2007) Cell 130, 1120-33.
  7. Zhao, B. et al. (2010) Genes Dev 24, 862-74.
  8. Zhao, B. et al. (2007) Genes Dev 21, 2747-61.
  9. Yu, F.X. et al. (2012) Cell 150, 780-91.
  10. Zhao, B. et al. (2010) Genes Dev 24, 72-85.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    Revision 1
    #46538

    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet

    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对 RL 细胞(蓝色)和 A-204 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb #14074 对 MCF-7 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse small intestine labeled with YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (left, green) and co-labeled with ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (right, blue).
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse kidney labeled with YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (left, green) and co-labeled with ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (right, blue).
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse cerebellum labeled with YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (left, green) and co-labeled with ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (right, blue).
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb #13008(上图)和 GAPDH (D6H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对 HeLa 细胞(泳道 1)或 YAP 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。YAP 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 YAP 的特异性。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照的 HeLa 细胞(泳道 1)或 YAP 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。YAP 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 YAP 的特异性。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb(上)、YAP Antibody #4912(中)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对未处理 (-) 或经 λ-磷酸酶处理 (+) 的 PANC-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。正如预计的一样,RL 细胞的 YAP 蛋白表达呈阴性。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb(上)、YAP Antibody #4912(中)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对经溶媒处理 (-) 或用 Forskolin #3828(10 μM,60 分钟;+)或肾上腺素(10 μM,60 分钟;+)处理的 MDA-MB-231 细胞进行蛋白质印迹分析。注意,在经毛喉素或肾上腺素处理后,诱导 YAP (Ser127) 磷酸化与 Xu 等人报道的结果一致。(2012) [9]。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(泳道 3)对 A-204 细胞提取物 YAP 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 用作二抗。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb,对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 13 Expand Image
    在 Leica® BOND Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 14 Expand Image
    在 Leica® BOND Rx 上使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb ,对石蜡包埋的人结肠腺癌(对照(左)或 λ 磷酸酶处理(右))进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 16 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb 对石蜡包埋的细胞沉淀物 A-204(左图)和 RL(右图)进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 18 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 19 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人类非小细胞肺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 20 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 21 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(顶部图)或 TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804(底部图)对石蜡包埋的人非小细胞肺癌(左图)、结肠癌病例 1(中图)或结肠癌病例 2(右图)进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 22 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人良性前列腺增生细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 23 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(左图)或 YAP Antibody(右图)对石蜡包埋的小鼠小肠进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测 YAP 蛋白上独特的非重叠表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 24 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(顶部图)or TAZ (E9J5A) XP® Rabbit mAb #72804(底部图)对石蜡包埋的未转染(左图,YAP/TAZ 低)或 YAP 转染(中图)或 TAZ 转染(右图)的 BEN 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 25 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的野生型 293T 细胞沉淀物(左图,阳性)或敲除 YAP/TAZ 的 293T 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 26 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 PANC-1(左图)和 RL(右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 27 Expand Image
    使用 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb(绿色)对低汇合度 MCF 10A 细胞(左图)、高汇合度 MCF 10A 细胞(中图)和 YAP 呈阴性的 RL 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。下图中的蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。在低汇合度(增殖)细胞中观察到越来越多的 YAP 蛋白位于胞核。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 28 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 CTGF 内结合,CTGF 是一种已知的 YAP 靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 29 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-H2052 细胞中提取的交联染色质和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 6(上图)内的结合,包括 YAP 的已知靶标基因 CTGF(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 30 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 NCI-2052 细胞中提取的交联染色质与 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers #14927、Human SMYD3 intron 2 primers 与 SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers #14928,通过实时 PCR对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 31 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 YAP 的已知靶标基因 TSPAN2(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 32 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 测定。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 1 (上图)内的结合,包括 YAP 的已知靶基因 TSPAN2(下图)(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    PhosphoPlus® YAP (Ser127) Antibody Duet: Image 33 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,通过 NCI-H2052 细胞和 YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 C1D 下游引物、人 TSPAN2 上游引物和人 ITM2A 下游引物进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。